Standard PCR buffer 제작

목차

1. 배경
1) PCR buffer의 기능
2) PCR buffer reagent의 역할

2. 목적

3. 실험재료 및 방법

4. 결론

5. 고찰

본문내용

* PCR buffer의 기능
Buffer의 역할은 완충작용을 통해 pH를 거의 일정한 값으로 유지시키는 것이다. PCR이 진행되면서 효소들의 활성으로 pH의 변화를 초래하는데 이를 방치하면 효소가 작용하기 힘든 환경을 만들게 되고 결국 PCR 효율의 감소로 이어지게 된다. 이런 현상을 방지하기 위해 buffer를 이용해 pH를 일정하게 유지시켜 주어 PCR에 필요한 화학적 환경을 구축해줄 수 있다. 그리고 효소 활성에 도움이 되는 여러 물질들을 추가해주어 안정적이고 효율적인 PCR이 진행될 수 있도록 해준다.

* PCR buffer reagent의 역할
>MgCl2
Magnesium chloride(MgCl2)는 Mg2+을 제공해주기 위해 사용되는 reagent다. Mg2+은 cell membrane과 cell wall의 구조적 안전성, 근육 세포의 생리학, 핵산의 구조 등에서 수많은 역할을 수행한다. 그 중에서도 Mg2+은 많은 효소들에게 필수적인 co-factor 역할을 하는데 이것이 바로 MgCl2를 PCR buffer에 포함시키는 이유이다. Mg2+은 DNA polymerase의 active site에서 기능해 DNA polymerization 과정에서 primer의 3’-OH와 새로 들어오는 dNTP의 phosphate group 사이의 결합을 negative charge를 안정시킴으로써 조직화 하는데 도움을 준다.(Fig.1) PCR 진행에 있어 Mg2+의 적절한 농도를 맞추는 것이 중요한데 너무 낮은 Mg2+ 농도는 polymerase의 활성을 줄여 PCR product가 없거나 소량이 나오는 결과를 초래

참고 자료

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https://www.thermofisher.com/kr/ko/home/life-science/cloning/cloning-learning-center/invitrogen-school-of-molecular-biology/pcr-education/pcr-reagents-enzymes/pcr-component-considerations.html#Mg
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https://www.sigmaaldrich.com/technical-documents/articles/biology/magnesium-chloride-solution.html
“KCl”, Wikipedia
https://en.wikipedia.org/wiki/Potassium_chloride#Laboratory_methods
“The role of KCl and MgCl2 in PCR”, Biotech articles
https://www.biotecharticles.com/Biotech-Research-Article/Role-of-KCl-and-MgCl2-in-PCR-3271.html
“완충용액”, Wikipedia
https://ko.wikipedia.org/wiki/%EC%99%84%EC%B6%A9_%EC%9A%A9%EC%95%A1
“Tris”, Wikipedia
https://en.wikipedia.org/wiki/Tris#cite_note-metalions-2
“몰 농도”, 사이언스올
https://www.scienceall.com/%EB%AA%B0-%EB%86%8D%EB%8F%84molarity/
“몰 농도”, zum학습백과
http://study.zum.com/book/13885
“dilution calculation”, Peter J. Mikulecky•Chris Hren, “How to Calculate Concentrations When Making Dilutions”, dummies
https://www.dummies.com/education/science/chemistry/how-to-calculate-concentrations-when-making-dilutions/