포항공대 화학생명공학실험[포스텍 A]Pre-Report (Ligation & Transformation for TA Cloning)

소개글

포항공대 화학공학과 전공필수 과목인
화학생명공학실험 보고서입니다
PRE-Report 는 실험전 사전지식을 정리하는 보고서이고
Final-Report는 실험후 결과를 정리하는 보고서 입니다.

두가지를 모두 참고하셔서 과제에 도움이 되시길 바랍니다.

목차

1. 실험 제목
2. 실험 목적
3. 이론 및 배경지식
4. 시약 및 기기
5. 실험 순서
6. 주의사항

본문내용

1. 실험 제목
Ligation & Transformation for TA Cloning

2. 실험 목적
이 실험의 목적은 DNA를 E.coli를 사용하여 복제하는 것이다. 그 과정은 총 4단 계 ligation, TA Cloning, Transformation, Selection으로 나눌 수 있다. 각각의 단계에 대한 원리와 작용하는 물질들을 이해하고 competent cell 과 heat shock 방법을 익힌다.

3. 이론 및 배경지식
1) Ligation
Ligation은 DNA or RNA 조각들을 서로 연결하는 과정이다. Hybridization 과 유사해 보이지만 다른 개념이다. Hybridization은 염기 쌍 하나가 결합되는 것을 의미하고 Ligation은 긴 DNA 조각들을 서로 연결하는 것이다.

2) T4 DNA ligase
Ligation을 일으키는 효소를 ligase 라고 한다. 그 중에서도 DNA의 ligation을 유도하는 효소를 DNA Ligase 라고 한다. Ligase의 종류에 따라 효율이 다른데, T4 DNA ligase 가 비교적 효율이 높은 ligase이다. 일반적으로 실험실에서 유전자 재조합 과정을 거칠 때 많이 사용하는 ligase이다.

3) TA Cloning
T-vector 와 adenine 이 3’에 붙어있는 PCR산물을 ligation하여 복제하는 과정을 말한다. Ligation을 할 때, vector 끝에 thymine이 붙어있고 복제하고자 하는 dna의 끝에 adenine이 붙어있으면 A와 T의 상보적 결합 때문에 반응의 효율이 높아진다. 이러한 총 과정을 TA Cloning이라고 부른다.

4) Transformation
Transformation이란 복제하고자 하는 유전자를 bacteria 세포 내로 주입하는 기술이다. 유전자 자체를 복제하는 것이 아니라 분열속도가 매우 빠른 대장균 같은 박테리아에 유전자를 주입하고 분열시켜 DNA를 복제해낸다.

참고 자료

Convergence of Molecular, Modeling, and Systems Approaches for an Understanding of the E.coli Heat Shock Response, Eric Guisbert, Takashi Yura, Virgil A. Rhodius and Carol A. Gross, Microbiol. Mol. Biol , 2008, p. 545-554
Sambrook et al, Molecular Cloning 3rd Ed.,Vol.1, Chapter 1
Frederick M. Ausubel et al., Current protocols in molecular biology, Vol.1, Unit 1.8
T. A. Brown, Gene cloning(5/e), Chapter 5, p. 87~106