[생명과학] Serial dilution과 Viable cell counting

소개글

도움이 되었음 좋겠네요 ^^

목차

1. serial dilution

2. Viable cell counting
1) 생균수 측정(평판 계수법, plate count technique)
2) 직접 현미경 계수법 (Direct microscopic count)

3. 참고문헌

본문내용

1. Serial dilution (연속희석)
1) 생균수 측정(평판 계수법, plate count technique)

 원리 : 살아 있는 세균은 colony를 형성한다는 것을 전제로 한다. 따라서 평판 배지 상에 형성된 colony의 수는 시료 내에 포함되어 있는 colony형성이 가능한 살아 있는 세균의 숫자로 볼 수 있다.

 재료 : 멸균평판배지, 미생물시료, 멸균식염수, 멸균시험관, 항온수조, 항온배양기

 방법 :
 Serial dilution을 이용하여 희석된 균액을 준비한다.
 적절한 희석균애 0.1ml를 취해 45℃의 항온 수조에 준비된 액상의 한천 배지에 넣고 잘 혼합한 뒤 멸균 페트리 접시에 부어 혼합 평판 배양(pour plat method) 혼합 평판 배양(pour plate method)

① test tube 입구를 불꽃으로 너무 오랫동안 가열하거나, 가열 후 즉시 주입하게 되면 배지가 타고 거품이 발생하므로 test tube 입구를 충분히 식힌 후 주입한다.
② 액상 Agar 배지를 petri dish에 주입할 때 기포가 생기지 않도록 서서히 부어야 하며, petri dish를 회전시 킬 때에도 기포가 발생하지 않도록 주의한다.
③ 유리 표면에 흡착하는 균이 있으므로 petri dish를 회전시킬 때 빨리 조심스럽게 흔든다.
한다. 배지가 굳은 후에, 접시를 뒤집은 상태로 항온기에 넣고 37℃에서 48~72시 간 배양한다.
 배양한 후 집락의 수가 30~300의 법위가 되는 희석 배율의 평판 배지를 골라 colony의 수를 구한다. 집락의 수에 희석 배율을 곱하면 원래의 시료 1ml에 존재 하는 세균 중, 집락 형성 능력이 있는, 즉 살아 있는 세균의 평균수를 구할 수 있 다. 희석액을 0.1ml 접종한 경우에는 동일한 희석액 1ml를 가한 경우 보다 10배 를 더 곱해야 한다.
ex) 1:1,000으로 희석한 희석액 0.1ml 접종한 배지의 colony수가 150개 있다면, 시료 1ml의 평균 세균수는 150 X 1000 X 10 =1,500,000세균/ml 또는 1.5X10이 된다.

참고 자료

 미생물학 기초 실험서
 최신 실험 미생물학 63~67p (신일상사2001)
ttp://www.brunel.ac.uk/departments/bio/project/micro/1basmic/growth/serial.htm
 네이버지식검색