생명공학실험. 미생물 유래 정량 분석 protease&AGI

최초 등록일
2019.01.24
최종 저작일
2018.12
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목차

1. Abstract
2. Introduction
3. Materials & Methods
4. Results
5. Discussion
6. Conclusion
7. References

본문내용

Abstract
Lowry법을 이용하여 Protease활성분석을 진행하였다. 표준곡선을 이용하여, 반응 시간에 따른 Tyrosine농도를 구해 효소의 유닛을 계산한 결과 MBLB1268 28.58Unit, MBLB1314 -2.175Unit, MBLB1315 6.713 Unit이 나왔다. 하지만 정성 분석 결과 MBLB1314도 Protease의 활성을 보인다. 뭔가 오차가 있었다는 뜻이었다. PNPG를 이용해 역으로 AGI의 활성을 구했다. MBLB1378은 0.3659, KIGAM065는 98.6219, KIGAM066은 87.953의 값이 나왔다. KIGAM065, KIGAM066 만이 활성을 보였다.

Introduction
정성분석(Qualitative analysis), 정량분석(Quantitative analysis)
정성분석은 시료에 성질을 알고 있는 약품을 처리해 먼저 물리적 또는 화학적 방법으로 물질 속의 성분을 확인, 검출하고 또 그 성분의 대략적인 양을 정하는 것이고 정량분석은 어떤 물질의 구성 성분의 함량을 결정하는 방법으로 구성 성분의 특성을 이용하여 그 물질의 함량을 결정하는 것이다.
Lowry method (Tyrosine 정량법)
Biuret반응과 phenol시약을 tyrosine, tryptophan, cysteine 잔기에 의해 환원 정색 시키는 반응을 병용한 방법으로 가장 널리 사용되는 단백질 정량법이다. 단백질 용액을 알칼리성 조건하에서 Cu2+와 반응시킨 다음에 folin시약을 첨가한다. 그러면 알칼리성 구리와 단백질의 아미노산사슬이 반응하고, phosphate molybdenum acid-tungsten acid complex가 잔기에 의해서 환원되어 파랗게 발색이 된다. Cu2+[푸른색] → Cu+[갈색], Folin시약 환원 : [노란색] → [푸른색]. 장점으로는 미량의 단백질 양을 정량할 수 있는 매우 민감한 방법이며, 단백질을 정제하는 과정에 있어서 단백질의 함량변화를 측정하는 데 매우 유용한 방법이다.

참고 자료

이흥락, 『대학 분석 화학』, 학문사 출판, 2006, p.431~440
Campbell et al, 전상학, 『캠벨 생명과학10판』, 바이오사이언스출판, 2016, p379~403/ 432~456

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