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목차

1. 실험 목적
2. 실험 이론
3. 실험 기기 및 시약
4. 실험 방법
5. 실험결과 및 고찰
6. 참고사항

본문내용

1. 실험 목적

- 재조합된 DNA를 competent cell에 삽입하여 형질전환 후, ampicillin과 x-gal이 들어 있는 LB plate에서 배양하여 colony를 형성시킨 후, 색깔로 재조합 DNA를 판별한다.
- 형질전환 기술을 익힌다.
- Lac Operon의 Mechanism을 이해한다.

2. 실험 이론
● Transformation
: 유전자가 삽입된 DNA를 bacteria cell 내로 주입 하는 과정.
박테리아의 유전자들은 순수한 DNA의 형태로 하나의 세포에서 다른 세포로 이동할 수 있다. 박테리아가 순수한 DNA를 환경으로부터 취해서 이 외부 DNA를 그 자신의 유전물질에
병합 시키는 이 과정을 transformation이라 한다.

1. Chemical method
: Cell에 화학적 처리를 하여 competent cell을 제조하고 여기에 목적으로 하는 DNA를
첨가시키는 방법

2. Physical method
: Electroporation (electric charge를 E. coli cell에 순간적으로 가하여 이때 생긴 pore를 통해 DNA를 세포 안으로 넣는 방법)

3. Virus를 이용한 방법

- Competent cell
: 정상적인 bacteria에 화학적 처리(CaCl2)를 하여 DNA가 잘 들어갈 수 있게 만든 cell.
ligation을 마친 DNA나 , circular 형태의 Plasmid를 증폭하거나 cloning을 끝내고 완성된 vector의 expression 하는 등의 용도로 이용된다.

- Mechanism

competent cell이 외부의 plasmid를 받아드리기 위해서는 DNA가 세포막 주위에 존재해야 하는데 DNA와 세포막 모두 phosphate에 의해 (-)charge를 띠기 때문에 서로 척력이 발생한다. 따라서 이를 중화시키기 위해 divalent cation(Ca2+, Rb2+) 등을 사용한다.

참고 자료

ligation, transformation, E. coli 배양법
biochemistry.yonsei.ac.kr
Molecular Cloning, Joseph Sembrook
Joseph Sambrook; David Russell. "Chapter 1: Plasmids and Their Usefulness in Molecular Cloning". Molecular Cloning - A Laboratory Manual. 1 (3rd ed.). pp. 1.20–1.21.
J R Rusche; P Howard-Flanders (March 25, 1985). "Hexamine cobalt chloride promotes intermolecular ligation of blunt end DNA fragments by T4 DNA ligase“. Nucleic Acids Research. 13 (6): 1997–2008.
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