Protein Extraction

목차

1. Protein Extraction
2. Protein Extraction 목적
3. Protein Extraction 원리
4. UV spectrophotometry (분광학적 방법)
5. Biuret method
6. BCA method
7. BCA Protein assay (추천)
8. Lowry method
9. Bradford method
10. Protein Extraction 주의점
11. Protein Extraction Protocol
12. Protein concentration determination (BCA법)

본문내용

* Protein Extraction
- Cell 또는 조직에서 특정 Protein을 추출해내는 과정
* Protein Extraction 목적
- lysis buffer를 이용해, 세포(막)을 잘게 쪼개 cell 속에 있는 protein을 추출함으로써 Sample에 대한 protein 수준에서의 변화를 확인하기 위함

* Protein Extraction 원리
- cell를 lysis하고 얻은 homogenizer(균질액)는 밀도가 다른 여러 가지 크기의 과립이 혼재하며 이는 centrifuge(분획 원심법)를 사용한다. 이는 크기에 따라 침강하는 속도가 다른 것을 이용하는 분획법으로 따라서 가장 큰 과립인 핵이 먼저 침강하고 mitochondria lysosome(미토콘드리아 리소좀), 소포체 순으로 침강한다.

• Protein 분리방법 Choice
☞ 동물의 조직으로부터 목적하는 단백질을 얻기 위해서는 적합한 재료를 선택하는 것이 중요하다.
- Homogenization : 조직, 식물의 세포벽
- Sonication : 조직
- Freeze/Thaw : 식물
- Reagent (Detergent) :동물세포(가장 많이 이용되는 방법)

Anionic Detergent
membrane을 쉽게 분산시켜 버리긴 하지만 모든 protein을 파괴하는 성질.
(ex: SDS, Choli acid-NA)
Non - lonic Detergent

일정 농도에서 protein 은 그냥 놔두고 lipid membrane 만 파괴.
(ex) Triton X-100, NP-40, Tween-20)

Amphionic Detergent
가용화 능력이 강하고 단백질 변성이 적음. pH7 이하가 되면 용해도가 낮아짐.
(ex) CHAPS, CHAPSO

• 원하는 protein이 위치하는 곳에 따른 Lysis buffer Choice
Whole Cell
RIPA buffer (89901)
Membrane
MEM-PER(89826)

참고 자료

없음