단백질 전기영동 예비

최초 등록일
2017.06.17
최종 저작일
2017.05
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목차

1. 실험제목
2. 이름
3. 실험목적
4. 실험원리
5. 시약 및 기구
6. 실험방법

본문내용

1. 전기영동이란?
단백질이나 핵산 등의 고분자물질은 하전을 띄므로 이를 기초로 하여 이들 분자를 전기장을 띤 gel에서 이동 분리시켜 이들의 순도나 성질의 분석 및 분리 등에 사용하는 방법을 전기영동(electrophoresis)라 한다.
단백질의 전기영동은 일반적으로 acrylamide를 bisacrylamide로 결합시킨 중합체인 polyacrylamide gel을 가장 많이 사용한다. 이 polyacrylamide gel의 농도가 증가할수록 구멍의 크기가 작아지므로 분리하고자 하는 단백질의 분자량을 알아서 polyacrylamide gel의 농도를 정한다.

2. 전기영동에서 단백질 분자의 이동속도에 영향을 미치는 요인
① 전하
생체 성분의 대부분은 약전해질이나 양성 (amphoteric) 전해질로 그 전하는 pH에 의해 성분 고유의 전하로 변화한다. 그래서 전기영동에 의한 분리나 분석은 pH에 좌우되는 경우가 많다. 최적 영동조건을 찾기 위해서는 pH와 이동도의 관계에서 기초가 되는 pH와 전하의 관계를 이해하고 있으면 편리하다.
약산성기는 수용액에서 전리되어 H+를 이룬다. 약염기성 기(weak basic radical)는 수용액에서 H+와 결합하여 염기의 양 ion을 이룬다. 이들 반응은 질량작용의 법칙이 성립되어 전리도(약산에서의 음 ion의 비율, 염기에서는 양 ion의 비율)와 pH의 관계는 pH=pKa 또는 pH=pKb를 중심으로 보면 모든 약산, 약염기에 공통이다.
전기영동법에서 pH를 결정하여 실험하는 것은 이동도가 pH에 따라 변하는 것을 우선적으로 이용하여 될 수 있는 한 좋은 분리를 얻고자 하는 것이 주된 이유이다.

② 완충액의 ion 강도
전기영동을 하는 입자와 완충액 성분 ion 간에는 Coulomb의 법칙에 의해 전기력이 작용하기 때문에 입자는 반대부호의 ion 분이기로 싸이게 된다. Ion 분위기는 전압이 걸리면 입자와 반대로 움직인다. 그리고 점성 때문에 용매 전체를 움직이므로 그만큼 입자의 속도가 낮아진다.

참고 자료

없음

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