PCR 제한효소 Restriction enzyme Ligation 라이게이션 예비 및 결과 보고서

최초 등록일
2016.08.31
최종 저작일
2016.03
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목차

1. 실험 제목
2. 실험 날짜
3. 공동 실험자
4. 실험 목적
5. 원리
6. 실험 방법
7. 고찰

본문내용

● PCR (중합 효소 연쇄 반응)
Polymerase chain reaction으로 시험관에서 특정 DNA 절편을 증폭해 많은 양을 얻고자 할 때 수행한다. 범죄 현장의 혈흔이나 멸종된 생물체 또는 유전병 분석을 위해 확보한 소량의 DNA 등을 증폭해 활용할 수 있도록 돕는 등 이용가치가 매우 높은 실험이다.

① denaturation: 이중가닥의 DNA를 외가닥으로 만드는 단계로 94 ℃에서 약 30초 진행한다.
② annealing: Primer가 결합하는 단계로 primer가 붙을 수 있는 적절한 온도를 선택해 약30초 정도 진행한다. 이 과정에서 온도를 너무 낮추면 primer가 비특이적으로 결합해 엉뚱한 DNA 절편이 증폭될 수도 있다.
③ synthesis(elongation): 새로운 DNA 가닥을 증폭하는 과정으로 Taq polymerase의 최적 조건인 72 ℃에서 진행한다. 합성하려는 DNA 길이에 비례해서 시간을 결정한다.

증폭되는 절편의 양 끝에 상보적인 18 bp 이상의 primer 두 가지를 합성해 표적 DNA, Taq DNA polymerase, dNTP들을 섞어 thermocycler라고 하는 기계 장치를 이용해 세 단계의 반응을 진행한다. ①단계에서 증폭하고자 하는 표적 DNA를 가열해 외가닥으로 만든후 ②단계에서 온도를 낮춰 primer가 서로 상보적인 표적 DNA 서열에 결합하도록 한다. 마지막 ③단계에서는 Taq polymerase가 dNTP를 이용해 상보적 DNA 가닥을 합성하게 된다. 이 과정을 20~30번 반복함으로써 수백만 개로 증폭 할 수 있다.

그림 2는 온도에 따라서 PCR 과정을 나타낸 것이다. Anneal primers 과정에서 G와 C의 결합 온도는 4 ℃이며 A와 T의 결합 온도는 2℃이다. 이 때 온도가 너무 낮으면 primer가 대충 아무렇게나 결합하기 때문에 붙을 수 있는 온도 한에서 높은 온도로 유지해야 한다.

참고 자료

없음

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