[동물발생학] Mammalian embryo (early) : blastocyst (morula, compaction)
- 최초 등록일
- 2016.04.04
- 최종 저작일
- 2007.05
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목차
1. Introduction
2. Method
3. Discussion
본문내용
Methods
1. 4% PFA(4℃)에서 고정 3~4일 보관
2. Dehydration(탈수과정)
50% EtOH ---60min, RT, 3번
70% EtOH ---60min, RT, 3번, overnight
95% EtOH ---60min, RT, 3번
100% EtOH ---60min, RT, 3번, overnight
3. Xylene --- 30min, RT, 3번
4. Xylene : Paraffin = 1 : 1 (굳을 때 까지 살짝 흔들어준다.), RT, overnight
5. 65℃에서 녹임
6. Paraffin 침투 --- 60min, 65℃, 3번
7. Embedding (section할 방향대로 조직을 고정시키고, 방향을 표시한다.)
8. Trimming (section 방향에 유의하여 고정)
9. section (5~7㎛) : 50℃의 water bath에서 slide 위에 올려 3~4시간 굳힘
10. 조직염색(hematoxylin/eosin stain)
① Paraffin 제거 xylene 1 --- 5min, 2번
② Rehydration (함수과정)
100% EtOH --- 3 min,(2번)
95% EtOH --- 3 min
90% EtOH --- 3 min
80% EtOH --- 3 min
70% EtOH --- 3 min
③ D.W. --- dipping
④ Hematoxylin --- 3~5 min (핵을 염색)
↳ D.W. --- dipping, 현미경으로 관찰
⑤ Eosin --- 2 min
⑥ Dehydration 및 destaining
70% EtOH --- 30sec or 1min
80% EtOH --- 30sec or 1min
90% EtOH --- 30sec or 1min
95% EtOH --- 1min or 2min
100% EtOH --- 5~10min
⑦ xylene∥--- 5~10 min
⑧ mounting
참고 자료
Scott F. Gilbert, 발생생물학, 라이프사이언스, 2003,
Neil Campbell, 생명과학, 라이프사이언스, 1999,