[분자유전학] Competent cell (수용성 세포, 컴피턴트 세포)

목차

I. Introduction
II. Material
III. Method
IV. Result
V. Discussion

본문내용

I. Introduction
자연계에서 형질전환은 박테리아가 유전자 정보를 얻는 주된 과정이 아니다. 이것은 실험실에서 Bacillus, Streptococcus종 등 몇 가지 종만이 쉽게 형질전환된다. 이러한 유기체를 상세하게 연구해 이것들이 DNA 결합과 도입에 대한 복잡한 기작을 가지고 있다는 것을 알 수 있다.
대장균(E.coli) 등의 대부분의 박테리아는 일반적인 조건에서 제한된 양의 DNA만을 도입한다. 이런 종을 효과적으로 형질전환하기 위하여 DNA 도입능력을 강화하는 물리적이거나 화학적인 처리를 거쳐야만 한다. 이러한 처리를 받은 세포를 반응능이 있다(competent)고 한다.
〖CaCl〗_2로 처리해 competent cell로 만들면 플라스미드가 더 효과적으로 cell에 들어갈 수 있게 된다. 〖CaCl〗_2는 DNA를 세포밖에 침전시키거나 염이 DNA 결합을 촉진시키도록 세포벽에 변호를 주기 때문인 것으로 보인다. 어떤 경우에는 〖CaCl〗_2에 담그는 것이 DNA 결합에만 영향을 끼치며 세포내의 실제적인 도입에는 아무 영향도 끼치지 않는다.

<중 략>

Methods
Colony 하나를 골라서 LB broth로 옮긴다.
37℃에서 3시간 정도 기른다. (30분마다 〖OD〗_600을 측정하여 값이 0.4정도가 될 때까지 기른다.)
무균상태에서 Ice-cold 2ml tube에 cell을 옮긴다.
4℃에서 10분 동안 4,000rpm으로 원심분리를 한다.
Cell로부터 media를 따라 버린 후, 1분 동안 inverted position으로 tube를 세워둔다.
Ice-cold 0.1M 〖CaCl〗_2 2ml를 넣고 cell을 다시 현탁한다.
4℃에서 10분 동안 4,000rpm으로 원심분리를 한다.
Cell로부터 액체를 따라 버린 후, 1분 동안 inverted position을 tube를 세워둔다.
Ice-cold 0.1M 〖CaCl〗_2 200μl를 넣고 다시 현탁한다.

참고 자료

T.A Brown, 유전자 클로닝 입문, 탐구당, 2004,
박용호, 동물유전공학, 선문각, 1996,
한국과학기술연구원 생명공학연구소, 분자생물학노트, 한림원, 1998,
주우홍, 미생물유전학, 월드사이언스, 2006,