단백질 정량

목차

1. 목적

2. 서론
1) UV법
2) Biuret법
3) Bicinchoninc Acid(BCA)법
4) bradford법

3. 재료 및 기구

4. 실험방법

5. 결과
1) standard의 흡광도
2) sample의 흡광도

6. 고찰

본문내용

단백질에 있는 티로신, 페닐알라닌 및 트립토판 잔기들은 각각 275nm와 280nm의 자외선을 흡수한다. 많은 단백질들에 있어서 이 아미노산들을 합친 수준은 거의 일정하므로 단백질의 농도는 280nm에서의 흡광도와 비례한게 된다. 단백질의 흡광도는 주로 아로마틱 잔기에 기인하는 점에 주목해야 하며 참고로 펩타이드 결합의 경우는 ~200nm에서 빛을 흡수한다. 흡광계수(ε :빛이 시료 1cm을 통과할 때의 흡광도)는 단백질 시료에 따라 다르다. 대부분의 단백질은 ε값이 1mg/ml시료에 대하여 0.4~1.5정도이며 아모마틱 잔기의 조성이 높은 라이소자임은2.65, Tyr와 Trp가 거의 없는 pravalbumin은 0.0의 값을 갖는다. 원하는 단백질의 흡광계수값을 알면 시료의 농도를 측정할 수 있다. 이에는 람버트-비어의 법칙이 적용된다. A=εbc (A=흡광값, b=pach의 길이 c= 시료의 농도 ε=흡광계수)

<중 략>

두개 이상의 펩티드 결합을 가지고 있는 단백질은 알칼리성 용액에서 묽은 황산구리로 처리했을 때 자주색을 띠는 물질을 생성한다. 색깔은 구리원자가 두개의 펩티드 결합에서 오는 네개의 -NH기 사이에서 배위화합물(coordination complx)을 형성함으로써 생기는 것으로 생각되고 있다. 뷰렛실험은 단백질 백본의 펩티드 결합을 이용하는 방법이므로 모든 단백질에 대해서 재현성이 꽤 좋다. 그러나 감도가 1mg/ml정도이며 Pro은 복합체 형성에 참여할 수 없고 Cu2+가 Cu+로 환원하기 때문에 감도가 낮다.

<중 략>

염색을 기초로 하는 분석법으로 coomassie brilliant blue G-250이라고 하는 색소가 단백질의 염기성과 방향족 아미노산 촉새와 결합하여 그 결과 흡수피크가 465nm에서 595nm로 이동하는것을 이용하는 방법이다. 감도가 5~200㎍/ml로 좋으나 단백질의 basic한 아미노산의 조성에 따라 염색되는 정도가 다르며 계면활성제의 영향을 받기 쉽다는 것이 단점이다.

참고 자료

없음