Lowry법을 이용한 단백질정량

목차

1. Subject
2. Object
3. Principle
4. Material
5. Method
6. RESULT
7. DISCUSSION & CONCLUSION
8. Reference

본문내용

1.Subject
Lowry법을 통한 protein의 정량

2.Object
Lowry test를 이용하여 단백질의 존재를 확인하고, 그 protein을 Lowry-Folin method으로 정량한다.

3.Principle
◆ 단백질의 정량방법

◆ Lowry법
1)개요
Lowry법은 단백질 정량에 있어서 비교적 넓게 적용되기 때문에 오랫동안 이용되어 왔다. 특히 단백질의 정제하는 과정에 단백질 함량변화를 측정하는데 유용한 방법이다. 2개 이상의 펩타이드 결합이 근접하여 존재할 때 강알칼리 상태에서 2가 구리이온(Cu2+)과 착염을 형성해 색을 띤다. 그리고 amino acid 중 트립토판과 티로신은 Folin reagent(Phosphomolybdic phosphotungstic acid)을 환원시켜 청색을 나타낸다. 발색반응 여부로 단백질을 정량 한다. 트립토판과 티로신의 함량은 단백질 종류에 따라 차이가 나며, 1mg의 단백질에 대한 색의 강도가 일정하지 않다. 그렇기 때문에 표준곡선을 이용한다. 측정할 수 있는 단백질의 감도는 10~200μ㎍ protein이다.
정량을 위해서는 농도를 알고 있는 단백질 표준 용액(Bovine serum albumin)을 농도별로 만들어 시료와 동일한 조건에서 발색시킨다. 발색의 강도는 단백질의 농도에 비례한다.
시료의 발색 정도와 단백질 표준 용액의 발색 정도를 비교하여 시료에 들어있는 단백질의 양을 정량한다.

참고 자료

단백질실험노트(상), 김승호, 월드사이언스, P38~39
한국생화학회, 실험생화학, 탐구당, p.53~72
생물학실험서, 민철기, 2006, 라이프사이언스, p.31~36
Essential cell biology, Bruce Alberts, p160.
http://blog.naver.com/ckurapika0?Redirect=Log&logNo=10072980469
http://100.naver.com/100.nhn?docid=20580