DNA 추출 및 증폭

소개

위의 자료는 카이스트 생물학실험의 보고서입니다.

목차

Ⅰ. Objective
Ⅱ. Introduction
Ⅲ. Material
Ⅳ. Method
Ⅴ. Result
Ⅵ. Discussion

본문내용

Ⅰ. Objective
- 자신이 원하는 DNA만을 얻어내어 이를 확인한다.
Ⅱ. Introduction
1) 제한효소를 처리한 DNA로부터 원하는 DNA조각을 쉽고, 간편하게 분리하여 사용하는 방법
(1) 전기적 회수법 (electroelution)
이 방법은 비교적 광범위한 크기의 DNA 조각을 분리하고자 할 때 사용하는 방법이다.
① 제한효소를 처리한 DNA를 전기영동한다.
② 전기영동이 완료된 gel을 wrap이 깔린 UV 투영판 위에 올려놓고 멸균된 칼을 이용해 원하는 band가 포함되는 가장 작은 조각이 되도 록 잘라낸다.
③ 미리 처리하여 놓은 가장 작은 투석백 (dialysis bag)의 한쪽 면을 dialysis clip으로 고정하고 멸균된 1X TAE buffer를 적당량 넣은 다음 잘라낸 조각을 넣는다.
④ 기포를 완전히 제거한 다음 dialysis clip으로 밀봉한다.
⑤ Gel running tank에 1X TAE buffer를 적당량 넣고 bag을 넣은 다음 전기 영동방법과 동일하게 실시한다.

<중 략>

- PCR 한 product를 전기영동 한다.
- 원하는 부분이 포함된 부분의 gel을 잘라서 NaI solution에 넣고 60℃에서 녹인다.. (원래는 gel 무게의 1.5배 NaI에 넣으면 되지면 넉넉하게 넣었음)
- 녹은 gel을 모두 column에 옮기고, 원심분리 (12000 rpm, 1min)
- Waste는 버리고 ethanol 700μl 넣고 washing 한다.
- DW 20μl 넣고 elution 한다.
- loading dye 3μl를 넣고 전기영동을 시켜서 size marker와 비교한다.
Ⅴ. Result
그림 1 위 밴드 사진은 다른 조의 결과로 제일 왼쪽은 사이즈 마커이고 , 차례대로 sample이다. 표시 된 부분처럼 밴드 하나만을 볼 수 있고, 이 것이 바로 eGFP를 포함한 DNA이다.
그림 2는 우리 조의 결과로 밴드 진한 밴드 하나를 볼 수 있다. 이 부분이 eGFP이다.
Ⅵ. Discussion
1. 전기영동할 때 EtBr 처리는 어떻게 할까?
EtBr은 매우 강력한 돌연변이 유발원이므로 전기영동하고 남아 있는 TAE buffer가 EtBr에 오염되어 버릴 경우 다음과 같이 제거한 다음 싱크대 에 버리도록 한다.

참고자료

· 없음