Gene cloning

소개글

클로닝 유전자

목차

❑ 서 론
❍ 틸라피아(Tilapia)

❑ 본 론
1. 실험날짜(Date)
2. 소속(By whom)
3. 실험제목(Subject)
4. 실험목적(Object)
5. 실험과정(Prosedure) 및 결과(Result)

❑ 결 론
❍ 토의(Discussion)

본문내용

제대로 된 white colony가 발견되지 않아, 다시 ligation 단계부터 실험을 실시하였는데, 처음 실험에서 ligation 하기 전에 DNA의 농도를 측정하지 않았기 때문에 발생했을 가능성이 있어 농도를 측정하였으나, vector의 6.6배에 해당하는 값으로 DNA 농도에는 이상이 없다는 것을 알 수 있었다. 그래서 다시 실험 할 때는 4℃에서 16시간 overnight 함으로써 결합할 수 있는 효율을 높여 white colony가 관찰되었다. 처음 실험에서 white colony가 발견되지 않은 것은 전기영동의 결과로부터 밴드가 연하게 나왔으므로 DNA의 농도가 낮아서 그렇다고 볼 수 있고 vector가 망가진? vector일가능성도 있다. vector에 제한효소를 너무 오랫동안 처리해서 ligation 해도 망가진 vector 이기 때문에 항생제에 대한 저항성을 보이지 않을 수도 있다고 한다. 그리고 도말할 배지가 오염이 되었거나, 도말할 배지에 항생제가 너무 많이 들어가는 경우도 있는데 이럴 경우 colony가 나타나기가 어렵다고 한다. 또한 대장균이 실온에 방치 되어 활성을 잃었거나, 도말할 때 시간이 지체가 되어 colony 형성에 영향을 준 것 같다. 환경적인 영향으로 DNA가 오염됐을 가능성도 있다.



제한효소를 처리하여 전기영동 결과 우려했던 것과 달리, 비교적 괜찮은 결과를 얻었다. 제한 효소는 DNA 분자의 특정 염기 배열을 인식하여 자르는 일종의 DNA용 가위이다. DNA도 특정 부위를

절단할 수가 있는데 DNA를 자른다는 것은 nucleotide들이 연결되어 있는 phosphodiester 결합을 끊어내는 것을 의미한다. 이런 역할을 하는 효소를 nuclease라고 하며 바깥쪽을 자르는가 안쪽을 자르는가에 따라서 각각 exonulease, endonuclease라고 부른다. 대부분의 제한효소는 4쌍 또는 6쌍의 염기배열을 인식하여 자르는데, 제한효소에 의해 잘라지게 되면 양 끝이 상보적인 가닥이 되거나 밋밋한 부분으로 된다. Endonuclease의 대표적인 것이 바로 제한효소이며, DNA에 존재하는 특정한 염기서열을 인식하고 인식한 서열부위 또는 그 근처에 존재하는 특정부위를 절단한다. 제한효소는 원래 세균이 자신의 세포 내로 침입해 들어오는 바이러스와 같은 외부 DNA를 제거하기 위한 방어기전으로 가지고 있는 것이며, 자신의 DNA는 절단부위의 염기를 메틸화 시켜서 자신의 제한효소가 자신의 DNA를 자를 수 없게 보호하고 있다. 제한효소는 여러 종류가 있는데, 보통 DNA 상에서 4개 이상의 대칭성 염기를 인식하면서 절단한다. 우리의 실험과 같이 T-vector를 사용한 경우 DNA insert는 EcoRⅤ 효소 위치에 삽입되게 되는데 그 가장자리 존재하는 효소(우리 실험에서는 EcoRI)로 처리하면 insert의 존재 여부를 알 수 있다. EcoRI의 처리로 위의 사진과 같이 삽입된 DNA와 vector가 분리가 되었다. 상대적으로 크기가 작은 DNA가 먼저 나아가 사진의 아래 부분에 위치하는 것을 볼 수 있다. DNA와 vector가 모두 존재하고 크기가 우리가 넣어준 것과 거의 동일한 크기인 500bp정도를 나타내었으므로, 우리가 원하는 DNA라고 할 수 있다.

참고 자료

없음