vector벡터,제한효소restriction enzyme and 전기영동

소개글

이번 실험의 목적은 플라스미드 DNA를 2가지 다른 종류의 제한효소를 이용하여 자른 다음 전기영동을 통하여 vector DNA와 insert DNA로 분리하고 이를 자외선 밑에서 확인한 후, 분리된 DNA 조각이 모인 gel을 잘라서 보관하는 것이었다. 플라스미드 DNA에 2가지 서로 다른 종류의 제한효소, XbaⅠ, BamHⅠ을 처리해 준 후, 제한효소의 반응 최적 온도 37 ℃에서 incubation한다. 제한 효소 반응 동안 전기영동에 필요한 gel을 만들고, 제한 효소 반응이 끝난 DNA 시료에 전기영동용 loading buffer를 첨가한다. 잘 섞은 후 pipette을 이용하여 잠겨있는 gel의 홈에 조심스럽게 넣는다. 이 때 size를 알고 있는 marker DNA와 잘리지 않은 플라스미드 DNA, single cut된 플라스미드 DNA를 함께 loading한다.

목차

abstract
introduction
method
result
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본문내용

이번 실험의 목적은 플라스미드 DNA를 2가지 다른 종류의 제한효소를 이용하여 자른 다음 전기영동을 통하여 vector DNA와 insert DNA로 분리하고 이를 자외선 밑에서 확인한 후, 분리된 DNA 조각이 모인 gel을 잘라서 보관하는 것이었다. 플라스미드 DNA에 2가지 서로 다른 종류의 제한효소, XbaⅠ, BamHⅠ을 처리해 준 후, 제한효소의 반응 최적 온도 37 ℃에서 incubation한다. 제한 효소 반응 동안 전기영동에 필요한 gel을 만들고, 제한 효소 반응이 끝난 DNA 시료에 전기영동용 loading buffer를 첨가한다. 잘 섞은 후 pipette을 이용하여 잠겨있는 gel의 홈에 조심스럽게 넣는다. 이 때 size를 알고 있는 marker DNA와 잘리지 않은 플라스미드 DNA, single cut된 플라스미드 DNA를 함께 loading한다. gel box의 뚜껑을 닫고 DNA가 양극 쪽으로 이동해갈 수 있도록 양극에 빨간 도선을, 음극에 검정 도선을 연결하고 80V를 걸어주어 1시간 30분 정도, Bromophenol blue와 xylene cyanol FF가 적당한 거리만큼 이동해갈 때까지 전기영동을 시행한다. 전기영동이 끝나면 gel을 Ethidium bromide 0.5 ㎍/㎖ 가 담긴 통에 담가서 20~40분간 염색을 한다. 염색이 끝나면 gel을 UV lamp 하에서 관찰하여 이동한 DNA 절편의 band를 확인한다. Marker와 비교하여 band size를 판단하고, uncut된 플라스미드 DNA, 그리고 single cut된 플라스미드 DNA와도 비교한다. 그리고 얇은 칼로 band가 뜬 gel 부분을 잘라서 e-tube에 넣고 냉동 보관한다. 결과로는 우리의 band는 marker와 비교했을 때, 30 kb 였으며, single cut DNA와의 band 차이를 육안으로 잘 알 수 없었다. 이 이유는 double cut을 했어도 잘려진 부분이 너무 작아서 둘이 구분이 잘 안되었다고 볼 수 있다.

참고 자료

Bruce Albers 外 6人, 필수세포생물학, 1999, pp 290~295
한국분자생물학회, 분자생물학, 아카데미 서적, 1997, pp 394~399, pp 510~511
Geoffrey M. Cooper, 세포학-분자학적 접근, 2000, pp 102~112 p 126
서강대학교 생명과학과, 현대생물학 실험2 실험서, 2008, p 5
http://en.wikipedia.org/wiki