[미생물학]【A+】미생물의 생화학적 실험

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목차

1. Principle
3. Materials
4. Methods

본문내용

1. Principle
Gelatin 배지에는 1ℓ당 20g의 gelatin이 포함되어 있는데 이의 가수분해는 HgCl2와 반응시켜 접종된 집락주변에 형성되는 투명구역(clear zone)의 존재를 확인함으로써 결정될 수 있다. Gelatin은 분자량이 큰 거대 유기화합물이므로 세균에 의해 분자량이 작은 polypeptide와 아미노산으로 분해되어야만 세포내로 유입되는데 이 과정은 세포의 효소인 gelatinase에 의해 이루어진다. 분해되지 않은 gelatin은 HgCl2와 반응하여 흰색 침전물을 형성하며, 분해된 경우에는 HgCl2와 반응하지 않아 집락 주위에 투명구역을 형성하는데 이는 gelatinase의 활성이 있음을 나타내며 gelatin(+)으로 표시한다.
gelatin + HgCl2 → 불용성 복합체(흰색 침전물)
아미노산 +HgCl2 → 반응 없음(투명구역 형성)

MR-VP 배지는 0.5% glucose을 포함하는 단백질 기본배지(7g peptone/ℓ)이다. 24~48시간 정도 배양한 후, 배지를 반으로 나누어 각각 MR 실험과 VP 실험을 실시한다. 세균들이 glucose를 발효할 때 다양한 형태의 부산물이 세포의 대사 경로에 의존한다. 한 세균은 glucose를 발효할 때 다양한 형태의 부산물이 세포의 대사경로에 의존한다. 한 세균은 glucose를 분해하는 동안 일차적으로 유기산을 생성하며 배지의 pH는 보통 4.2 아래로 떨어진다. pH 지시약인 methyl red의 첨가에 따르는 붉은색의 생성은 MR(+) 결과를 나타낸다. 노란색이 남아 있다거나 엷은 오렌지색이 남아 있다면 실험은 MR(-)이다. 젖산발효 등과 같은 혼합산 발효세균들의 대부분은 MR(+) 결과를 나타낸다. 알코올 같은 중성 산물을 생성하는 세균들은 보통 MR(-)이다. 2,3-Butanediol을 생성하는 대사회로에서 acetylmethyl- carbinol(acetion)은 중간대사물질로 생성된다. Acetylmethylcarbinol의 존재는 VP 실험에 의해 결정된다. Diacetyl은 peptone broth에서 발견되는 creatine이나 다른 guanidine과 반응하여 붉은색의 분자 복합체를 형성한다. 붉은 색으로의 변화는 양성 VP 실험을 나타내고 acetylmethylcarbinol의 존재를 나타낸다. 산소가 diacetyl의 형성에 요구되기 때문에 VP 실험은 색 형성을 촉진하기 위하여 수분 단위로 힘차게 흔들어야 한다. 양성 실험을 얻기 위하여 20분 정도 수행하여야 한다.

참고 자료

없음