인간배아줄기세포 배양기법

소개글

인간줄기세포 배양 기법 실험방법 정리 보고서 입니다.

줄기세포 실험 기본적인 모든것을 배울 수 있습니다.
특히 현재 사용되고 있는 세포주별 특징과 실험상의 주의점이 정리 되어 있어 유용합니다.

배양액 조성에서 부터 배양 순서와 준비해야 할 것이 모두 작성되어 있습니다.

목차

1. General Notes on SNUhESC Culture
2. STO Feeder Cell Culture
3. EXPANSION OF HUMAN EMBRYONIC STEM CELLS
4. CRYOPRESERVATION OF HUMAN EMBRYONIC STEM CELLS.
5. Differentiation of Human Embryonic Stem Cells
6. Characterization of Undifferentiated Human Embryonic Stem Cells
7. Feeder-Free culture system for hES -mTeSR1

REAGENTS
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본문내용

* 일반적으로 기본적인 differentiation 유무는 cytoplasm의 비율로 확인한다.
* 1 colony는 3000~5000개의 cell로 구성
* hES는 mono_badtags로 자란다.
* MTA허락후 cell을 무료로 분양받을 수 있다. 처음 vial을 받앗을때는 5mldml media에 넣고 얼린 것을 풀어준뒤 centrifuge하고, 새 media로 넣어주어 10일동안 키운다.
* ES cell transfer후 하루 attach 시킨뒤 2일째부터 media change

1. Media

Complete STO medium
- Dulbecco`s Modified Eagle`s Medium(DMEM)
10% Fetal Bovine Serum(Hyclone)
50 units/ml penicillin and 50 ug/ml streptomycin

Mtomycin C
- Dissolve 2 mg Mitomycin C in 4ml DW to generate a 500ug/ml working stock
- Store protected from light at -20℃
STO freezing medium
- complete STO medium with 5% DMSO

2. Expansion of STO Feeder Cells
(1) Thawing and Culture of Feeder Cells
1) Frozen STO mouse fibroblasts (CRL 1503, ATCC, USA) are thawed in 37℃ warm water.
2) Transfer the cells gently to a 15ml conical tube. Add 10ml of complete STO medium dropwise slowly and

참고 자료

없음