소개글
일반미생물학 실험 후 작성한 보고서로 변기물을 희석하여 균 수를 측정하고, OD값과 pour method로 생균 수를 관찰하여 E. coli의 성장곡선을 그리는 것이 주된 실험 내용입니다. Serial dilution technique, Pour method, OD측정(spectrophotometric analysis), 박테리아 성장 곡선의 원리를 포함하고 있습니다.목차
Date:10월 5일
Subject:
∙ Experiment 1: Enumeration of microorganisms
; Sample(변기물)희석하여 균 검사하기 (균 수 측정)
∙ Experiment 2: The bacterial growth
; Esherichia coli 의 growth curve 그리기
2-1: OD값 측정
2-2: pour method로 생균 수 관찰
Principle:
∙ Serial dilution technique
∙ Pour method의 원리:
∙ OD측정의 원리 (spectrophotometric analysis):
∙ 박테리아 성장 곡선:
Reagents & Apparatus:
∙ 균주 (Esherichia coli), 0.9% NaCl 용액, MHB 용액, agar plate 5개, agar 용액, 관찰할 액체 sample(흙탕물)
∙ 빈 plate 4개, tube 7개, blue pipette(100 1000µl), yellow pipette(20 µl), tip, pipette, spreader, 큐벳, OD를 측정할 spectrophotometer, incubator, 알코올 램프, E. coli 가 담겨 있는 플라스크와 그 것을 덮을 호일.
Procedure:
∙ 준비단계;
∙ Experiment 1:
∙ Experiment 2- 1: OD값 측정
∙ Experiment 2- 2: pour method로 생균 수 관찰
∙ 마무리 단계;
Observations & Results:
∙ Experiment 1:
- 원액과 희석한 원액에서 나온 균 관찰
- Colony의 총 수 관찰 결과
∙ Experiment 2- 1:
- 시간에 따른 OD측정 값
- Generation time 구하기
∙ Experiment 2- 2:
- E. coli 관찰
- E. coli의 colony 수
- mL 당 E. coli의 수 (number of CFUs per mL-CFU/mL)
- E. coli의 OD값이 1일 때 균 수 추정
Discussion
∙ Experiment 1: Enumeration of microorganisms
; Sample 희석하여 균 검사하기 (균 수 측정)
∙ Experiment 2- 1: OD값 측정
∙ Experiment 2- 2: pour method로 생균 수 관찰
- Review question
Summary:
∙ Experiment 1: Sample(변기물) 희석하여 균 검사하기 (균 수 측정)
∙ Experiment 2- 1: OD값 측정
∙ Experiment 2- 2:pour method로 생균 수 관찰
본문내용
∙ Experiment 1:1. 이라 쓰인 tube에 Blue pipette으로 NaCl 용액 0.9 mL를 tube에 옮긴다.
2. Yellow pipette으로 실험에 쓰일 sample(흙탕물)용액을 0.1 mL덜어서 1번 tube에 넣는다.
3. Blue pipette으로 tube안에 있는 용액을 잘 섞어준다.
4. Sample 이라 쓰인 tube에 pipette으로 NaCl 용액 0.9 mL를 tube에 옮긴다.
5. Yellow pipette으로 실험에 쓰일 3번에서 완성된 tube의 용액의 0.1 mL덜어서 4번 tube에 넣는다.
6. Blue pipette으로 tube안에 있는 용액을 잘 섞어준다.
7. 이라 쓰인 tube에 pipette으로 NaCl 용액 0.9 mL를 tube에 옮긴다.
8. Yellow pipette으로 실험에 쓰일 6번에서 완성된 tube의 용액의 0.1 mL덜어서 7번 tube에 넣는다.
9. Blue pipette으로 tube안에 있는 용액을 잘 섞어준다.
10. 이라 쓰인 tube에 pipette으로 NaCl 용액 0.9 mL를 tube에 옮긴다.
11. Yellow pipette으로 실험에 쓰일 9번에서 완성된 tube의 용액의 0.1 mL덜어서 10번 tube에 넣는다.
12. Blue pipette으로 tube안에 있는 용액을 잘 섞어준다.
13. 이제 각각 원액, 10배 희석한 용액(3번 tube), 100배 희석한 용액(6번 tube), 1000배 희석한 용액(9번 tube), 10000배 희석한 용액(12번 tube)을 blue pipette으로 다시 한번 잘 섞어 준다.
14. 13번을 진행하면서 yellow pipette으로 0.1mL씩을 덜어내어 각각의 labeling이 된 agar plate에 각각 덜어낸다.
15. Spreader를 조심이 flaming한다.
16. Spreader를 식힌다.
17. Spreading은 뻑뻑함을 느낄 때까지 진행한다.
18. Tube는 잘 버리고, agar plate는 incubator에서 뒤집어서 잘 배양한다.
19. Agar plate에서 균 수를 측정하면서 잘 관찰한다.