각 기관별 조직에서 세포분리방법에 대한 설명

소개글

랫트 및 마우스의 조직에서 세포를 분리하기 위한 방법을 설명해 놓은 실험 Method 리포트입니다. 많은 활용하시기 바랍니다.

목차

1. Brain
2. Liver
3. Lung
4. Kidney
5. spleen
6. Bone marrow
7. Blood

본문내용

⚀ Brain

1. BRAIN을 꺼내서 수막제거후 CORTEX부분만 적출한다.

2. cold PBS (1.37mM NaCl, 4.3mM Na2HPO4, 0.024M Na2EDTA) 에 4번 washing

3. 적출한 CORTEX부분을 1X HBSS에 넣는다.

3. small pieces (250-500mg) 의 brain tissue를 petridish 에 tissue 조각을 넣고 가위 등으로 chopping.

4. 조각난 CORTEX를 75cm2 flask에 총량이 10ml이 되게 1X HBSS를 넣고 80rpm에서 10분동안 교반한다.

5. 여기에 0.1% trypsin이 포함된 20ml 1x HBSS를 첨가하여 10~20 분 교반한다.
( 잘게 부서진 조직이 점성을 가지고 서로 붙을 때까지..- Total Volume-30ml)

6. 이렇게 점성을 보이는 primary cell을 10ml pipet으로 pipetting으로 분리시킨후 70um strainer를 이용하여 filtraion 한다.

7. 이렇게 모아진 cell은 800rpm에서 5분동안 원심분리한다.

Cell isolation methods

⚀ Liver
1. liver tissue 를 실험이 끝난 동물에서 적출한다.

2. 적출한 liver 를 cold PBS (pH7.4) 로 rise 후 filter paper를 이용하여 dry 시킨다.

3. 조직을 homogenization 이나 collagenase 처리 전까지 aluminium foil, on ice 상태를 유지한다.

4. Minced liver tissue : 간 조직을 homogenization buffer* 에서 g 당 1ml 의 volume으로 하여 suspension 해 준다.
* homogenization buffer (pH7.5) : 0.075M NaCl, 0.024M Na2EDTA)

5. Potter-Elvehjem glass homogenizer (GLAS-COL, GKH-GT Apparatus, Terre Haute, IN, USA) 를 이용하여 ice 위에서 부드럽게 homogenization 을 수행한다.

참고 자료

없음