난소에서 미성숙 난포란을 채취한 후 배양하여 성숙정도를 확인한다

최초 등록일
2010.05.06
최종 저작일
2010.05
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난소에서 미성숙 난포란을 채취한 후 배양하여 성숙정도를 확인한다


난소에서 미성숙 난포란을 채취한 후 배양하여 성숙정도를 확인하기 위하여 실험을 하였다. 지난시간에 했던 실험 과정인 돼지의 자궁내 난소에서 난포액을 채취한 후, 난포액 내에 존재하는 미성숙 난포란을 현미경 하에서 pick-up하였다. 10ml주사기의 바늘을 교체한 후 주사기를 이용하여 미성숙 난포란을 채취하였다. 주사바늘이 얇을 경우, 미성숙 난포란의 난구세포가 벗겨질 우려가 있기 때문에 조금 더 큰 주사바늘로 교체하였다. 난소인 ovary의 표면에 울통불퉁한 부분을 주사기로 흡입하면 난포액을 채취할 수 있으며 난포액 내에는 미성숙난포란이 존재한다.

목차

실험 주제
실험 일시
실험 장소
실험 기구
실험 방법

실험 결과




고 찰

본문내용

실험 기구
실체현미경, Ovary, PBS medium, 비닐장갑, 10ml주사기,
18gauge주사바늘, 80mm petri-dish, 35mm petri-dish,
pipett, four-well dish, CO2 incubator
[※ PBS medium : PBS란 인산식염수 완충액으로 세포내에서 필요한 인산을 제공하 는 역할을 한다. Washing PBS는 난포를 pick-up하기 위해 난포액을 희석시키는 과정에서 사용되었다.]
실험 방법






난소에서 미성숙 난포란을 채취한 후 배양하여 성숙정도를 확인하기 위하여 실험을 하였다. 지난시간에 했던 실험 과정인 돼지의 자궁내 난소에서 난포액을 채취한 후, 난포액 내에 존재하는 미성숙 난포란을 현미경 하에서 pick-up하였다. 10ml주사기의 바늘을 교체한 후 주사기를 이용하여 미성숙 난포란을 채취하였다. 주사바늘이 얇을 경우, 미성숙 난포란의 난구세포가 벗겨질 우려가 있기 때문에 조금 더 큰 주사바늘로 교체하였다. 난소인 ovary의 표면에 울통불퉁한 부분을 주사기로 흡입하면 난포액을 채취할 수 있으며 난포액 내에는 미성숙난포란이 존재한다. 한 손에는 비닐장갑을 착용하고 다른 한 손으로는 주사기를 잡고 ovary의 울퉁불퉁한 난포 표면의 튀어나온 부분에 주사바늘을 찔러 빨아들이는 방식으로 난포액과 난포란을 채취하였다. 제대로 빨아들이면 “뾱” 소리와 함께 주사기 안으로 미량의 난포액이 빨려 들어오게 된다. 한번 찌르는데 아주 적은양만 채취되기 때문에 여러 번 반복한 후 petri-dish에 옮기는 식으로 조원들과 함께 난포액을 채취하였다. 어느 정도 모인 난포액에서 미성숙난포란을 Pick-up하기 위해 washing PBS(인산식염수 완충액)로 난포액을 희석시켰다. 희석시킨 난포액을 재물대 위에 올려놓고 실체 현미경으로 적당한 배율을 맞춘 후 pipett을 이용하여 80mm petri-dish에 난자를 pick-up하였다. petri-dish는 실험 전 바둑판모양으로 표시를 만들어 두면 현미경 작업시 작업이 훨씬 수월해진다. 난포란을 PBS Medium이 첨가된 35mm크기의 petri-dish로 옮겨가며 혈액이나 다른 이물질이 없는 순수한 미성숙 난포란만을 회수하였다. 이를 각조별로 Four-well dish에 옯긴 후 24시간동안 5% CO2조건의 incubator에서 배양을 시켰다. 하루가 지난 후 현미경을 통해 성숙된 난포란을 확인할 수 있었다.

◈ 실험 과정
① 18G바늘의 주사기를 이용하여 난소(ovary)에서 난포액을 흡입(inspiration)하여 미성숙 난포란을 채취한다.
② 미성숙난포란을 채취(aspiration)하여 모은 미성숙 난포란과 난포액을 80mm petri-dish에 분주한다.

참고 자료

없음

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