분자진단

최초 등록일
2020.10.12
최종 저작일
2019.07
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목차

1. Polymerase Chain Reaction(PCR)
2. Reverse Transcription(RT)-PCR
3. Real-time PCR/qRT-PCR

본문내용

1. DNA 증폭 이후 결과 확인
– 증폭 중에는 결과 확인 불가능

2. PCR후에 전기영동 후 확인 과정 필요
- PCR Thermar Cyclear 기기 외에 전기영동 장치 및 Gel document system필요
- 소요시간이 길다

3. DNA probe 필요하지 않음
- 주형 가닥에 5’(Forward primer)와 3’(Reverse primer)가 붙어서 반응이
일어나므로 별도의 probe 필요 없음

4. PCR product의 size 알 수 있음
- 증폭산물의 크기를 확인함으로 증폭산물의 총 량 알 수 있음
- 증폭산물을 이용하여 유전자 염기서열 분석(Sequencing) 등 추가실험이 가능
- 유전자 량의 증폭되는 정도 확인 불가능

5. 낮은 민감도
- real time PCR에 비하여 Extension time(72도 1.5분)이 길어 민감도 떨어짐
- 따라서 비특이적인 반응이 발생할 확률이 상대적으로 높음

1. RNA를 주형으로 DNA를 만드는 과정
- RNA 바이러스를 DNA로 전사 시킴
2. cDNA를 주형으로 PCR
3. One-step RT-PCR과 Two-Step RT-PCR

1. DNA 증폭 중 실시간 확인 가능
- DNA가 증폭되는것을 실시간으로 증폭곡선 확인 가능

2. PCR 후 gel running 확인 과정 불필요
- PCR 끝나고 수치화된 여러값을 통해 결과 분석
- PCR 장비 외에 필요한 기기 없으며, 실험 시간이 짧은 장점

3. 형광물질 dye가 있어야 값을 읽을 수 있음
- Incalculator method (SYBR Green)
- Probe method (TaqMan)

참고 자료

없음

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