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Trypsin EDTA와 Cell Transfection 기술2025.11.171. Trypsin EDTA Trypsin EDTA는 세포 배양 실험에서 필수적인 시약이다. Trypsin은 단백질 분해효소로서 collagen 등의 섬유성 및 당단백질을 분해하고, EDTA는 금속 이온을 킬레이트하여 세포의 접착을 제거한다. 이를 통해 플라스크 등의 배양기 표면에 부착된 세포를 효과적으로 떼어낼 수 있으며, 세포 수확 및 배양에 필수적이다. 또한 세포가 과도하게 밀집되는 것을 방지하고 단일 상태로 유지하여 실험의 정확성과 신뢰성을 높인다. 2. Cell Transfection - 화학적 방법 Cell Transfe...2025.11.17
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SDS-PAGE & Western Blot 결과 레포트2025.05.111. SDS-PAGE SDS-PAGE는 단백질을 크기에 따라 분리하는 기술로, 단백질을 SDS로 변성시켜 음전하를 띄게 한 뒤 전기영동을 통해 분리한다. Stacking gel과 Separating gel의 pH 차이를 이용해 단백질을 동일한 선상에 정렬시킨 후 크기에 따라 분리한다. 이를 통해 단백질의 분자량을 추정할 수 있다. 2. Western Blot Western Blot은 SDS-PAGE로 분리된 단백질을 membrane에 전이시킨 뒤, 특정 단백질을 항체를 이용해 검출하는 기술이다. 1차 항체와 2차 항체를 이용해 목적...2025.05.11
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세균의 형질전환 / bacterial transformation2025.01.121. 유전자 재조합 유전자 재조합은 서로 다른 genome에서 얻은 유전자를 한 세포로 몰아서 돌연변이 없이 새로운 유전형질을 가진 cell을 만드는 과정이다. 유전자 재조합 방법에는 transformation, transduction, conjugation이 있다. Transformation, 즉 형질전환은 세포에 외부 유전자를 인공적으로 도입시켜 숙주세포에 넣어서 세포가 원래의 특성이 아닌 다른 유전형질을 갖도록 하는 것이다. 2. 박테리아의 DNA 흡수 이유 박테리아가 외부 DNA를 흡수하는 이유는 유성생식을 하는 유기체와 다...2025.01.12
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PCR을 통한 gene structure 분석2025.05.011. EtOH Precipitation DNA는 전하를 띄는 인산골격을 가지고 있어서 극성이다. 물도 극성이므로 물에 잘 녹는다. DNA를 뭉치게 하려면 물과 DNA간 결합을 약화시켜야 한다. Ethanol은 물보다 훨씬 덜 극성이다. 따라서 ethanol을 첨가하면 DNA의 인산기와 다른 양이온간의 결합이 강해지면서 DNA 침전을 형성한다. 이 과정을 위해선 적절한 양의 양이온이 필요하다. 너무 많으면 DNA와 같이 침전되고 너무 적으면 침전되지 못한 DNA가 생긴다. 이 실험에선 3M sodium acetate를 final 0....2025.05.01
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Bacterial Transformation 레포트2025.01.211. Transformation Transformation은 특정 DNA 조각을 생명체의 유전체 내로 삽입하여 새로운 genotype이 발현되도록 하는 방법이다. 박테리아에 plasmid를 통해 gene을 도입하는 기술로 알려져 있지만, 동물이나 식물에서도 transformation 기술이 개발되어 유전자 변형 생물(GMO)을 만드는 기술로 이용되고 있다. Bacterial plasmid는 restriction enzyme이 작용하는 multicloning site와 Selectable Marker로 사용하기 위한 antibioti...2025.01.21
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재결합 단백질의 발현/ Expression of recombinant proteins in E. coli2025.01.121. GST-tagged Proteins glutathione S-transferase (GST), histidine (HIS), 기타 친화성 태그를 이용하여 단백질을 정제하게 되면 기존에 잘 알려진 생화학적 특성을 가진 단백질과 알려지지 않은 생화학적 특성을 가진 재조합 단백질의 N 말단에 결합하여 정제를 도와준다. GST 단백질은 번역 시에 안정적이고 가용성이 높은 단백질로 빠르게 접히기 때문에, GST 태그를 포함하면 태그가 없을 때보다 더 잘 발현하고 용해도를 촉진하는 경우가 많다. 2. BCA assay BCA는 Lowry...2025.01.12
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[생명공학] CD34+ HSC isolation from umbilical cord blood, mixed lymphocyte reaction2025.05.031. CD34+ HSC isolation from Umbilical Cord Blood HSC(Hematopoietic Stem Cell)는 인체 내에 존재하는 모든 혈액 세포로 분화가 가능한 줄기세포입니다. CD34 gene은 HSC부터 어느정도 분화가 이루어진 progenitor level에서까지 발현되기 때문에 이를 CD34+ cell들을 세포막에 붙어있는 CD34 protein의 특징을 이용해서 정제할 수 있습니다. 이 실험에서는 MACS microbead sorting 방법을 이용하여 항원항체반응을 통해 CD34+ HSC를...2025.05.03
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MTT assay A+ report2025.01.171. MTT assay MTT assay는 세포 대사 활성을 색 변화로 측정하는 실험으로 세포 독성 실험이라고도 한다. Tetrazolium salt인 MTT를 살아 있는 세포에 처리하면, 미토콘드리아 안의 oxidoreductase enzyme(NADPH)에 의해 환원되어 보라색을 띠는 formazan 결정체를 형성한다. 죽은 세포의 경우, 미토콘드리아가 터져 없으므로 formazan이 형성되지 않고, 색을 띠지 않는다. 이렇게 생성된 formazan은 비수용성으로, 유기용매 또는 계면활성제 등에 녹여 570nm에서 흡광도(세포의...2025.01.17
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Lowry protein assay(단백질 정량 분석) 결과레포트2025.01.221. Lowry protein assay Lowry protein assay 실험은 단백질 정량 분석에 대해 이해하고 그중에서 Lowry method로 단백질 정량 분석을 하는 실험이다. 농도를 알고 있는 서로 다른 농도의 BSA sample 5개의 흡광도를 측정하는 실험을 진행하고 두 번째 실험에서는 최적의 파장대(750nm)에서 미지 농도의 단백질 sample 2개와 대조군의 파장을 측정하여 비교하였다. 실험을 통해 구한 흡광도를 이용하여 BSA standard curve를 구하고 그래프를 통해 R^2 값과 선형 방정식을 구할 ...2025.01.22
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E. coli와 Yeast의 Cell Culture2025.05.061. Prokaryote Prokaryote는 핵막이 없는 원핵생물을 의미하며, 단세포생물일 경우가 많고 주로 무성 생식 방법인 Binary Fission을 통해 번식한다. 이외에도 진핵생물인 Fungi에 속하는 이스트의 몇 가지 종도 Binary Fission을 한다. 2. Binary Fission Binary Fission은 가장 간단한 생식 방법 중 하나로, DNA 복제 후 세포 분열을 통해 두 개의 동일한 딸세포가 형성된다. 이러한 Binary Fission은 미생물의 유전적, 환경적 요소에 따라 생식 주기가 결정되며, 이...2025.05.06
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