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[생물공정실험] 3주차 Gene expression analysis by RT-PCR 예비보고서2025.04.261. cDNA 정의 및 합성 방법 cDNA(complementary DNA)는 RNA를 주형으로 역전사효소와 DNA 중합효소에 의해 합성된 DNA입니다. 역전사효소를 이용한 cDNA 합성에서는 RNA와 annealing 위치에 따라 3종류의 primer를 사용할 수 있습니다. (1) 역전사 효소 (reverse transcriptase; RTase), (2) RT반응에 사용하는 primer (oligo dT primer, random primer, gene-specific primer). 2. Downstream applicatio...2025.04.26
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유전학2_경북대2025.05.031. DNA microarray DNA microarray는 고체 표면에 부착된 미세한 DNA 조각의 집합체입니다. DNA 칩과의 차이점은 DNA 칩은 합성된 올리고뉴클레오타이드로 배열되어 있고, DNA 마이크로어레이는 변성된 DNA가 배열되어 있습니다. DNA 마이크로어레이의 장점은 매우 희귀한 전사체도 검출할 수 있고 전사체 수준의 작은 차이도 감지할 수 있습니다. 단점은 프로브의 하이브리드화 효율이 다를 수 있고 사전 서열 지식이 필요하다는 것입니다. 2. RNA-seq RNA-seq은 각 전사체를 서열에 따라 식별할 수 있고...2025.05.03
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세포생리학실험_cell culture, Genomic DNA Isolation_genomic DNA 추출, total RNA 추출, 전기영동2025.01.131. 세포 배양 HEK 293T 세포를 DMEM 배지와 FBS를 사용하여 배양하였다. 세포는 처음에는 동글동글한 모양이었지만 점차 바닥에 붙어 자라나면서 별모양의 형태를 띠었다. 배지의 색이 점점 노란색으로 변하면서 세포가 죽기 시작하였다. 이를 통해 세포가 일정 횟수의 분열을 한 후 노화되는 과정을 관찰할 수 있었다. 2. Genomic DNA 추출 HEK293T 세포에서 genomic DNA를 추출하였다. 세포를 용해시킨 후 단백질과 RNA를 제거하는 과정을 거쳐 순수한 DNA를 분리하였다. 전기영동 결과 DNA 밴드가 마커보다...2025.01.13
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Real-time PCR을 이용한 유전자 발현 분석2025.01.231. 전사(Transcription) 수준에서의 유전자 발현 분석 기법들 유전자 발현 분석 기법에는 Single gene analysis와 Whole genome analysis가 있다. Single gene analysis는 개별 유전자의 발현량을 확인하는 실험 기법으로 Northern Blotting과 Real-time PCR이 있다. Whole genome analysis는 세포 내 전체 유전자의 발현량을 확인하는 실험 기법으로 RNA sequencing이 있다. 2. cDNA 합성에 사용될 수 있는 primer의 종류 cDN...2025.01.23
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생물공정실험 예비보고서_RNA Extraction and Quantification2025.01.071. 유전자 발현과 조절 유전자 발현 경로는 전사와 번역으로 나뉘며, 전사 개시, 전사 후 가공, 번역 단계에서 조절될 수 있다. 전사 활성은 크로마틴 구조 변화, 전사인자 결합 등으로 조절되며, 전사 후에는 mRNA 가공, 번역에서는 mRNA 사용 속도 조절 등으로 이루어진다. 2. TRIzol을 이용한 RNA 추출 TRIzol 시약은 페놀-구아니딘 이소티오시아네이트로 구성되어 세포막을 파괴하고 RNase를 억제하여 RNA를 선택적으로 추출할 수 있다. 세포 용해액을 원심분리하면 RNA가 수용층에 존재하게 되며, 이후 isopro...2025.01.07
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생화학 실험 보고서 - PCR2025.01.271. PCR(Polymerase Chain Reaction) PCR은 중합효소 연쇄반응으로, 열을 가하여 DNA의 특정 부분을 증폭시키는 기술이다. reverse transcription PCR은 mRNA에 대해 PCR을 적용하기 위한 방법으로, mRNA를 역전사시켜 cDNA를 합성하고 primer와 DNA polymerase를 이용해 DNA의 일부분을 복제, 증폭시킨다. PCR은 Denaturation, Annealing, Extension의 3단계로 진행되며, 주형 DNA, primer, dNTP, DNA polymerase가 ...2025.01.27