소개글
"병원미생물학 미생물 분류와 관찰 문제"에 대한 내용입니다.
목차
1. 미생물 염색 동정법
1.1. 실험 목적
1.2. 미생물의 형태 관찰
1.3. 그람 염색법
1.3.1. 그람 염색의 원리
1.3.2. 그람 양성균과 그람 음성균의 구분
1.4. 항산성 염색법
1.5. 포자 염색
1.6. 협막 염색
1.7. 기타 염색법
2. 세균의 선택배지
2.1. 선택배지의 종류
2.1.1. 기초배지
2.1.2. 영양강화배지
2.1.3. 선택배지
2.1.4. 증균배지
2.1.5. 감별배지
2.1.6. 수송배지
2.1.7. 보존배지
2.2. LB 배지의 구성
2.3. 배양을 위한 환경 조건
3. 공중낙하균과 신체미생물 관찰
3.1. 공중낙하균 관찰
3.1.1. 공중낙하균의 특성
3.1.2. 실험 결과 및 예상 미생물
3.2. 신체미생물 관찰
3.2.1. 인체 정상 미생물총
3.2.2. 실험 결과 및 예상 미생물
4. 참고 문헌
본문내용
1. 미생물 염색 동정법
1.1. 실험 목적
현미경의 구조를 배우고 그람 염색의 원리와 방법을 숙지하며 그람양성균과 그람음성균을 관찰하여 미생물 분류의 기본을 익히는 것이 이 실험의 목적이다. 현미경은 접안렌즈와 대물렌즈를 이용하여 미생물을 육안으로 관찰할 수 있을 정도까지 확대하는 장치이다. 그람 염색법은 세포벽의 펩티도글리칸 함량에 따라 염색시약들의 투과성이 다른 것에 착안한 방법으로, 그람양성균과 그람음성균을 구분할 수 있다. 이를 통해 미생물의 종류를 동정하고 분류할 수 있게 된다.
1.2. 미생물의 형태 관찰
미생물의 형태 관찰은 미생물학 실험에서 매우 중요한 부분이다. 미생물은 육안으로는 잘 보이지 않기 때문에 현미경을 이용해야 관찰할 수 있다. 현미경을 통해 미생물의 세포 모양, 크기, 배열 등을 관찰하여 미생물의 종류를 구분할 수 있다"
대장균의 경우 평균적인 크기가 5μm도 채 되지 않아 육안으로는 관찰이 불가능하다. 따라서 현미경을 이용하여 미생물을 관찰할 수밖에 없다. 현미경의 대표적인 종류로는 광학현미경이 있는데, 이는 2종류의 렌즈인 접안렌즈와 대물렌즈를 이용하여 미생물을 확대하여 관찰할 수 있다. 보통 100배에서 3,000배까지 확대할 수 있다. 관찰 시에는 조리개를 이용하여 빛을 모아주거나 별도의 광원을 사용하여 관찰하기도 한다. 또한 초점을 정확히 맞추기 위해 조동나사와 미동나사를 이용한다. 특히 1,000배 이상의 고배율로 관찰할 때는 유침법을 사용하여 개구수를 증가시킨다.
미생물을 관찰할 때는 대부분 염색을 하게 된다. 미생물은 대부분 투명하기 때문에 그대로 관찰하면 잘 보이지 않기 때문이다. 염색 방법에 따라 미생물의 종류를 구분할 수 있다. 예를 들어 크리스탈 바이올렛으로 염색하면 단순히 미생물의 존재 유무만을 확인할 수 있다. 하지만 그람 염색법, 항산성 염색법, 포자 염색, 협막 염색 등 다양한 염색 방법을 통해 미생물의 특성을 더 자세히 관찰할 수 있다"
1.3. 그람 염색법
1.3.1. 그람 염색의 원리
그람 염색의 원리는 미생물의 세포벽 구조에 따른 차이를 이용한 것이다. 미생물은 세포벽의 구조에 따라 그람 양성균과 그람 음성균으로 구분된다.
그람 양성균의 세포벽은 펩티도글리칸층이 두껍게 발달되어 있어 크리스탈 바이올렛-요오드 복합체를 흡착하고 유지할 수 있다. 반면 그람 음성균의 세포벽은 얇은 펩티도글리칸층과 외막이 존재하며, 유기용매인 에탄올로 처리하면 크리스탈 바이올렛-요오드 복합체가 쉽게 세포 밖으로 빠져나오게 된다. 이후 대조염색제인 샤프라닌에 의해 핑크색으로 염색되어, 그람 양성균과 구분될 수 있다.
즉, 그람 염색에서 미생물의 세포벽 성분 차이에 따라 염색성이 달라지는 것을 이용하여 미생물을 그람 양성균과 그람 음성균으로 구분할 수 있는 것이다.
1.3.2. 그람 양성균과 그람 음성균의 구분
그람 양성균과 그람 음성균의 구분은 미생물 분류에 있어 중요한 기준이다. 그람 염색법은 세포벽의 펩티도글리칸 함량에 따라 염색되는 정도가 달라지는 것을 이용한 방법이다.
먼저, 그람 양성균은 세포벽에 펩티도글리칸이 두껍게 존재하기 때문에 크리스탈 바이올렛과 요오드 복합체가 세포벽 내부에 잘 고정된다. 이후 에탄올로 탈색해도 이 복합체가 잘 제거되지 않아 보라색을 유지한다. 반면, 그람 음성균은 세포벽의 펩티도글리칸이 얇고 외막이 발달해 있어 크리스탈 바이올렛-요오드 복합체가 세포 밖으로 잘 빠져나가 탈색되어 붉은색으로 염색된다.
이처럼 그람 양성균과 그람 음성균은 세포벽의 구조적 차이로 인해 염색성과 탈색성이 다르게 나타나며, 이를 통해 두 군집을 구분할 수 있다. 그람 양성균은 보라색, 그람 음성균은 붉은색으로 관찰된다. 이러한 차이는 미생물의 동정 및 분류에 널리 활용되고 있다.
1.4. 항산성 염색법
항산성 염색법은 결핵균이나 나병균과 같은 항산성균을 염색하는 방법이다. 이들 박테리아는 세포벽에 지질이 풍부하여 쉽게 염색이 되지 않지만, 한 번 염색이 되면 강산에도 탈색이 되지 않는 성질을 이용한 염색법이다.
항산성균의 세포벽에는 지질인 마이코산이 풍부하게 존재한다. 이 마이코산에 의해 세포벽이 매우 두꺼워지고 치밀해지면서 일반적인 염색법으로는 잘 염색이 되지 않는다. 하지만 항산성균을 염기성 염료로 염색한 뒤 강산으로 탈색을 하면 일반 세균들은 탈색되지만, 항산성균의 세포벽은 여전히 염색된 상태로 남게 된다. 이러한 특성을 이용하여 결핵균과 나병균 등의 항산성균을 선택적으로 염색할 수 있다.
항산성 염색법의 대표적인 방법은 카르볼 푸흐신 염색법이다. 이 방법에서는 염색액으로 카르볼 푸흐신을 사용하며, 열처리를 통해 세포벽의 지질을 용해시켜 염료가 투과되도록 한다. 그 후 염기성 염료로 대조염색을 실시하면 일반 세균은 파란색으로, 항산성균은 붉은색으로 관찰된다.
항산성 염...
참고 자료
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[네이버 지식백과] 배지, 두산백과
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