소개글
"단백질 정량실험"에 대한 내용입니다.
목차
1. 단백질 정량 실험
1.1. 실험 목적 및 이론적 배경
1.1.1. 단백질 정량의 목적
1.1.2. 단백질 정량법의 원리
1.1.2.1. 자외선 흡수법
1.1.2.2. Lowry-Folin 정량법
1.1.2.3. Bradford 정량법
1.1.2.4. Biuret법
1.1.2.5. BCA 정량법
1.2. 실험 재료 및 방법
1.2.1. 자외선 흡수법
1.2.2. Bradford 정량법
1.3. 실험 결과
1.3.1. 자외선 흡수법 결과
1.3.2. Bradford 정량법 결과
1.4. 실험 결과 고찰
2. 참고 문헌
본문내용
1. 단백질 정량 실험
1.1. 실험 목적 및 이론적 배경
1.1.1. 단백질 정량의 목적
단백질 정량의 목적은 시료 내에 포함된 단백질의 양 또는 농도를 구하는 것이다. 단백질 정량은 대부분의 생화학실험의 기본이 되는 과정으로, 실험 결과의 신뢰성을 높이기 위해 정확한 단백질 정량이 중요하다. 생물학 분야의 실험의 경우 다른 분야에 비해 실험적 오류를 파악하기 어려우므로, 단백질 정량이 잘못되면 실험을 처음부터 다시 시작해야 한다. 따라서 실험을 준비하는 단계에서 정확한 단백질 정량을 실시하는 것이 필수적이다.
1.1.2. 단백질 정량법의 원리
1.1.2.1. 자외선 흡수법
자외선 흡수법은 단백질의 방향족 아미노산인 페닐알라닌(Phenylalanine), 트립토판(Tryptophan), 타이로신(Tyrosine)이 280nm에서 최대 흡광도를 나타내는 특성을 이용하여 단백질의 농도를 측정하는 방법이다. 또한 단백질의 펩타이드 결합이 200nm에서 흡광도를 가지는 것을 활용하기도 한다.
자외선 흡수법은 다른 단백질 정량법과 달리 별도의 시약 첨가나 반응 과정이 필요하지 않아 단순하고 빠르게 단백질 정량이 가능하다는 장점이 있다. 하지만 280nm에서 측정되는 흡광도는 단백질의 아미노산 조성, 완충액, 이온 강도 등에 따라 달라질 수 있어 표준 단백질을 이용한 표준 곡선이 필요하지 않다는 점에서 장점이 있지만 정확성이 다른 방법에 비해 낮을 수 있다는 단점이 있다. 또한 50~1000 μg/mL 범위의 단백질 농도에서만 측정이 가능하다는 제한이 있다.
1.1.2.2. Lowry-Folin 정량법
Lowry-Folin 정량법은 알칼리 조건에서 Cu2+이온이 펩타이드 결합(peptide bond)에 결합하는 Biuret 반응에 기초를 두고 있다. 단백질의 펩타이드 결합과 알칼리성 상태에서의 Cu2+과의 결합에 의해 Cu2+이 환원되어 Cu+이 생성된다. 생성된 Cu+ 이온이 Folin & Cioclacalteu's Phenol 시약과 반응하여 진한 청색으로 발색된다. 이때의 흡광도를 이용하여 구하고자 하는 단백질 시료의 농도를 측정하는 방법이 Lowry 정량법이다.
Lowry 정량법은 Biuret 반응과 Folin-Ciocalteu 반응을 통해 단백질을 정량한다. Biuret 반응에서는 알칼리 용액 내 Cu2+이온이 단백질의 펩타이드 결합과 결합하여 Cu+로 환원된다. Folin-Ciocalteu 반응에서는 생성된 Cu+이 Folin-Ciocalteu 시약을 환원시켜 청색으로 발색된다. 이때의 발색 정도는 시료 내 단백질 함량...
참고 자료
권혁빈 외 8인, “일반생물학실험”, 유한문화사, 2001.
