PCR : RAPD analysis

소개글

PCR : RAPD analysis자료입니다.
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목차

1. PCR ( Polymerase Chain Reaction) - 중합효소 연쇄 반응
2. RAPD PCR

본문내용

1. PCR ( Polymerase Chain Reaction) - 중합효소 연쇄 반응
PCR은 DNA의 특정 부분을 증폭하는 방법이다. PCR은 기본적으로 denaturation, annealing extension 이렇게 세 단계로 구성되어 있고, 이 과정이 반복되면서 DNA가 증폭된다.
열안정한 DNA polymerase에 의해서 DNA 합성은 시작되며, DNA 합성이 시작되는 곳은 한 세트의 두 개의 프라이머에 의해서 결정된다. 보통, PCR 반응을 수행하게 되면 DNA의 특정 서열이 그 수에 있어 백만 배 정도 증가하게 된다. 이러한 PCR 반응에 의한 Product는 겔 전기영동을 통하여 검지된다. 증폭된 부분은 보통의 길이에 있어 150-3,000의 base pair를 갖는다. 다수의 유전자 부위를 포함하고 있는 DNA 단편에서 증폭하고자 하는 유전자 부위를 어닐링(annealing)하는두 개의 프라이머를 제작하여 PCR을 수행한다.

<PCR과정>
1. Denaturation
PCR의 가장 첫 단계이며, 이 과정 때 DNA는 두 가닥으로 갈라진다. 이것은 온도가 높아짐에 따라 DNA의 염기 사이에 있는 수소결합이 끊어지기 때문이다. 일반적으로 94℃ 정도에서 1분간 진행된다.
2. Annealing
각각 두 가닥으로 분리된 DNA molecule에 primer가 붙는 과정이다. Primer는 그들과 상보적인 염기를 가지고 있는 DNA 서열에 달라붙는다. 이 과정이 바로 PCR의 정확성을 결정짓는 단계이며, 어느 온도로 진행되는 가는 primer의 길이와 그것을 이루고 있는 염기의 종류에 따라 달라진다. 만약에 온도가 너무 높으면 primer가 DNA molecule에 잘 달라붙지 않아 그 효율이 떨어지며, 반대로 온도가 너무 낮을 경우에는primer가 mismatch할 확률이 높아서 정확도가 그만큼 더 떨어진다. 일반적으로 온도는 아래의 식에서 결정되며, 여기서 trial & error 과정을 포함하여 좀 더 구체적으로 결정한다.

참고 자료

없음