[생화학] Interaction between HIF-1a (ODD) and hARD1 does not induce acetylation and destabilization of HIF-1a

소개글

Interaction between HIF-1a (ODD) and hARD1 does not induce acetylation and destabilization of HIF-1a 에 대한 실험입니다.

목차

1. 이론(소개)
2.1. 세포 배양과 세포간이동
2.2. Western blotting
2.3. 면역침강
2.4. 실험상 상호작용과 acetylation 분석법
3. 결과
4. 토의

본문내용

1. 이론(소개)
동물세포의 생존은 organized vascular 연결망에 의해 제공되는 산소와 질소의 충분한 공급에 달려있다. 지속적인 Precise homeostatic control 대사조절은 충분한 산소압, pH 그리고 적당한 당 농도와 다른 영양소의 조절에 의해 혈액의 흐름을 조절한다. 이 균형은 종양 성장 과정에서 혈관의 팽창을 야기시키고 이 결과 저산소증 미소환경을 만들어 형성되는 고형물 종양에 의해 깨진다. 종양의 과정은 생화학적 적응과 유전적 변형에 의해 발생한다.저산소증의 적응 세포의 중심은 전의성 복합 HIF-1의 활성이다. HIF-1은 저산소증 효과를 진전시키는 angiogenesis 와 종양의 생존을 증진시키는 당 대사를 포함하는 유전자 과다 반응을 조절한다. 그 HIF 복합체는 산소-조절 HIF-1α 단위와 구조적 표현인 HIF-1β 단위로 구성되어 있다. acetyltransferase hARD는 HIF-1α의 non-hypoxic 조절인자 중의 하나이다. 이 연구는 HIF-1α의 조절에 의한 ARD1의 역할에 대한 결과를 얻고자 한다. 예상되는 결과는 hypoxia는 hARD1 단백질의 정도를 조절하지 않으며, hARD1의 과발현은 HIF-1α 안정화에 영향을 주지 않는다는 것이다. 그러나 HIF-1α와 hARD1 간의 특별한 상호작용은 하는 것으로 알려져 있으며 두 단백질 사이에는 기능적 관계가 존재하는 것으로 추정하고 있다.

2.1. 세포 배양과 세포간이동
인간 세포주 HEK293 세포, HT1080, RCC4 그리고 HeLa 세포는 10% FBS와 3% L-글루타민이 포함된 DMEM배지로 37℃, 5% CO2 세포배양기에 배양하였고, MCF-7 세포는 RPMI1640으로 배양하였다. 유전적 형질전환용으로 Fugene6 또는 lipofectamine을 사용하였다. Hypoxia(1% O2)는 산소방에서 시행했고 hypoxia mimicking agent는 200uM CoCl2와 150uM desferroxamine을 첨가하였다. 플라스미드는 HA-HIF-1α로 인코딩되었다. Xpress-hARD1으로 인코딩된 플라스미드는 pcDNA4MaxHis에 hARD1 cDNA을 서브클로닝하여 얻

참고 자료

없음