mRNA분리, PCR, cloning, trnasformation
- 최초 등록일
- 2008.05.04
- 최종 저작일
- 2007.12
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소개글
Rat brain에서 mRNA 분리
RT을 통해 SYT11의 cDNA 생성
PCR을 통해 SYT11의 dsDNA 생성
SYT11과 vector를 제한효소로 자른 후 SYT11를 vector에 삽입
E.coli에 Transformation
엠피실린 배지에 Plating
한 colony를 채취하여 transformed E.coli로 부터 plasmid 분리
Plasmid를 제한효소로 자른 후 전기영동하여 SYT11 확인
위의 모든 실험을 정리하는 발표자료입니다.
보고서를 위한 자세한 원리나 결과가 필요하신분들은 저의 다른 리포트 자료를 확인하시기 바랍니다.
목차
LabⅠ. mRNA Isolation from Rat Brain
Lab Ⅱ. RT-PCR
LabⅢ. Cloning
Lab Ⅳ. Transformation
Lab Ⅴ. Plasmid preparation
Lab Ⅵ. Restriction mapping
본문내용
실험 목표
특정 DNA를 증폭시켜 E.coli에 transformation 통해 대량생산할 수 있다.
Trnasfomed E.coli에서 특정 DNA를 분리하고 확인할 수 있다.
실험 개요
Rat brain에서 mRNA 분리
RT을 통해 SYT11의 cDNA 생성
PCR을 통해 SYT11의 dsDNA 생성
SYT11과 vector를 제한효소로 자른 후 SYT11를 vector에 삽입
E.coli에 Transformation
엠피실린 배지에 Plating
한 colony를 채취하여 transformed E.coli로 부터 plasmid 분리
Plasmid를 제한효소로 자른 후 전기영동하여 SYT11 확인
LabⅠ. mRNA Isolation from Rat Brain
원리
Mixture of cytoplasmic RNAs
Oligo dT matrix
High salt buffer !
원리
Low salt buffer !
LabⅠ. mRNA Isolation from Rat Brain
LabⅠ. mRNA Isolation from Rat Brain
mRNA와 DNA(Oligo-dT)의 phophate backbone 간의 Repulsion
High-salt buffer
높은 농도의 Mg2+
Hybridization
Low-salt buffer
낮은 농도의 Mg2+
참고 자료
없음
