Transformation(형질전환)

소개글

Transformation(형질전환)에 관한 실험레포트입니다..강조하지만 목차와 본문내용 잘 읽어보시고 참고만하세여...자료 구입해 놓고 딴소리 하시지 마시고, 절대 참고용으로 만든겁니다....
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목차

1. Transformation 이란 무엇인가?
▶ Fresh 또는 frozen 방법을 이용한 competent cell의 제조...
▶ Calcium chloride를 이용한 competent cell의 제조...
▶ Ultra-competent cell의 제조(Inoue method)...
☞실험방법
◆competent cell(DH5a,대장균)준비과정
2. Transformation(2) 이란 무엇인가?
※DNA ligation kit를 이용한 경우의 Transformation(2)....
▶ 형질전환의 시작
▶ 형질전환의 메커니즘.
▶ E.coli의 형질 전환..

본문내용

1. Transformation 이란 무엇인가?
Transformation(형질전환)이란 DNA를 bacteria 세포 내로 주입하는 과정을 말한다.
E.coli cell이 DNA를 uptake할수 있는 상태, 즉 conpitent 상태로 만드는데 이러한 cell을 conpitent cell이라고 한다. 구체적으로 Competent cell이란 정상적인 bacteria에 화학적 처리를 하여 DNA가 잘 들어갈 수 있게 만든 cell을 의미하는데 화학처리에 쓰이는 시약은 다음과 같이 여러가지가 있으며 이 중 가장 중요한 것은 calcium chloride이다.

 calcium Chloride
 Manganase Chloride
 Hexamminecobalt Chloride
 Dimethyl Sulfoxide (DMSO)

Competent cell을 이용한 transformation의 과정은 다음 그림과 같다.
CaCl2로 처리하여 competent cell로 만들면 plasmid가 cell에 들어갈 수 있게 되는데 Heat shock을 가하면 plasmid 가 cell 안으로 들어가는 효율을 증가시킬 수 있다.

현재 실험실에서 competent cell을 제조하는 방법으로 다음과 같은 두가지가 주로 사용된다. 첫번째 방법은 fresh frozen 방법으로 DH1, DH5, MM294등의 E. coli를 높은 효율(5 *108 transformed colonies/μg of supe
rcoiled DNA)로 형질전환시킬 수 있으며, strain에 따라서 효율이 떨어지기도 하지만 사실상 거의 모든 경우에 사용할 수 있는 방법이다. 보다 간단한 방법인 두번째 방법은 calcium chloride를 이용하며 대략 107 transformed colonies/μg of

참고 자료

광주보건대학교 임상병리과
제주대 해양생물공학과 분자유전학실험실