[생화학 실습]PCR 방법 및 결과. 토의(자세함)

소개글

PCR의 이론은 상대적으로 짧지만 세세한 방법및 토의, 결과해석은 매우 자세하게 나와 있습니다. 자세한 디스커션을 원하시는 분께 적절한 자료 입니다.

목차

1. Introduction
2. Material and Method
3. Result
4. Discussion
5. Reference

본문내용

4. Discussion
이번 실습은 PCR의 원리를 배우고 Agarose gel electrophoresis를 이용해 DNA band를 확인해보는 실험이었다.
PCR을 이용하면 원하는 특정 DNA를 대량으로 증폭할 수 있는데 그 방법은 간단했으나 원리는 DNA의 replication과 관련하여 생화학적으로 상당히 중요하였다. 크게 보면 DNA replication과 PCR 모두 DNA를 복제하는 것이기 때문에 많은 유사점을 가지고 있다. 그러나 DNA replication의 경우 수많은 종류의 enzyme에 의해 복잡한 기작으로 일어나는 반면에 PCR을 이용한 DNA증폭에서는 Taq1 polymerase를 이용하여 in vitro 상에서 denaturation -> annealing -> polymerization 의 과정의 반복에 의해 DNA를 증폭할 수 있음을 알 수 있었다. 즉, PCR의 구성요소(Template, Primer, Taq1 polymerase, dNTPs)와 온도변화(94℃->50~60℃->72℃) 만을 이용하기 때문에 매우 간단하게 DNA를 증폭할 수 있음을 알았다. PCR에 대해 세부적으로 들어가서 PCR tube는 열전도성이 좋아야 한다는 점, G-C basepair 의 비율에 따라 Primer 결합 시 적정 온도가 결정 된다는 점, Primer에는 template와 상보성이 맞는 forward와 reverse의 두 가지가 반드시 필요하다는 점, PCR cycle이 돌수록 DNA pol의 활성이 줄어들기 때문에 실제로 무한정 복제할 수는 없다는 점, error를 줄이기 위해 proofreading 기능이 있는 Pfu polymerase를 이용하기도 한다는 점 등을 알 수 있었다.

참고 자료

http://biochemistry.yonsei.ac.kr/biochem_workshop/PCR.php
http://biochemistry.yonsei.ac.kr/biochem_molecular/gene_cloning_08.php