일반생물학 실험-단백질의 정량

소개글

생물학실험

단백질을 정량하는 실험을 하고 그 결과와 디스커션까지 포함되어 있습니다.
레포트 작성에 도움이 될 것입니다^^

단백질 정량 방법에 관한 자료가 인터넷에 거의 올라와 있지 않아 작성하는데 시간과 노력이 많이 들어간 자료입니다.

목차

I. Introduction

1. 실험목적
수용액에 녹아 있는 단백질의 양을 Bradford assay 를 이용하여 농도를 구할 수 있다.

2. 실험원리
>단백질의 정량 방법
i) UV absorbance

ii) Lowry-Folin

iii) BCA

iv) Bradford assay


> 랑베르-비어의 공식

Ⅱ. Materials and Methods

Ⅲ. Result

Ⅳ. Discussion

그림, 그래프 (직접 작성) 포함되어 있습니다.

1. BSA(Bovine Serume Albumin) 표준 용액을 이용하여 표준 곡선을 제작하라. 주어진 농도범위에서 직선이 관찰되는가? 관찰된다면 직선의 기울기와 y절편을 구하여라.

3. 설탕 용액, 요소, Tris-HCl의 흡광도 값은 각각 어떠한가? 이것이 의미하는 바는 무엇인가?

Ⅴ. Reference

본문내용

I. Introduction

1. 실험목적
수용액에 녹아 있는 단백질의 양을 Bradford assay 를 이용하여 농도를 구할 수 있다.

2. 실험원리
>단백질의 정량 방법
i) UV absorbance

단백질에 있는 티로신, 페닐알라닌 및 트립토판 잔기들은 각각275nm와 280nm의 자외선을 흡수한다. 많은 단백질들에 있어서의 이 아미노산들의 합친 수준은 거의 일정하므로 단백질의 농도는 280nm에서의 흡광도와 비례하게 된다. 물론 예외가 있기는 하지만 순수한 단백질의 경우 단백질의 농도가 1mg/ml이고 자외선이 통과하는 경로가 1cm일 때 280nm에서의 흡광도를 측장함으로써 신속히 결정할 수 있다. 이 방법은 정량하는 데 시간이 적게 들 뿐만 아니라 정량하고 난 후의 단백질을 환전히 회수하여 재이용할 수 있는 이점이 있다.
그러나 자연물 중에는 280nm에서 흡광을 나타내는 그 밖의 화합물들이 많이 있기 때문에 단백질이 아닌 물질에서도 흡수반응이 일어날 수 있다는 단점이 있다. 특히 핵산은 260nm에서 최대 흡수를 가지고 있지만 280nm에서도 흡광도가 상당히 크기 때문에 단백질과 핵산이 같이 있는 경우 핵산에 의한 흡수가 영향을 미쳐 정확한 단백질의 농도를 알기 힘들게 된다.

ii) Lowry-Folin

Lowry-Folin 방법은 단백질뿐 아니라 건조된 시료에도 이용될 수 있다는 것이 특징이다. 특히 이 정량방법은 5ug/ml정도의 단백질 양을 정량할 수 있는 대단히 민감한 방법이어서 널리 쓰이고 있다. 이 Lowry 방법에서 사용하는 Folin-Ciocalteau시약에 의한 발색은 뷰렛 시험에서와 마찬가지로 알칼리성 구리와 단백질의 아미노산 사슬의 반응과 포스포몰리브덴산-포스포텅스텐산 염들이 단백질에 있는 티로신과 트립토판에 의한 환원반응으로 생긴다. 두 가지 주요 반응을 간략히 나타내면 다음과 같다.

참고 자료

>생물학 실험서, 라이프 사이언스, 민철기, 강창수

>http://kin.naver.com/db/detail.php?d1id=11&dir_id=110205&eid=Br8mDiIRuWmMsd+nK C66n0lH0B0ej+HP&qb=QnJhZGZvcmQgYXNzYXk=
>http://kin.naver.com/db/detail.php?d1id=11&dir_id=110205&eid=7+6sP5gvfb5KGq8+yq+3TYvjOjAkUKom&qb=QnJhZGZvcmQ=