[전기영동] 단백질 분자량 측정 (SDS-PAGE)

소개글

1. 실험 목적

이번 실험은 전기영동 방법중 하나인 SDS-PAGE를 이용하여 단백질의 분자량을 알아보는 실험이다. 전기영동이란 단백질이나 핵산 등의 고분자물질은 하전을 띄므로 이를 기초로 하여 이들 분자를 전기장을 띤 매질(겔)에서 이동 분리시켜 이들의 순도나 성질의 분석 및 분리 등에 사용하는 방법이다. 단백질의 전기영동은 일반적으로 아크릴아미드(acrylamide)를 비스아크릴아미드로 결합시킨
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목차

1. 실험 목적
2. 실험재료 및 실험방법
(1) 실험재료
(2) 실험방법
3. 실험결과
4. Discussion
# Sample Buffer의 구성
# 전기영동의 원리
5. Reference

본문내용

2. 실험재료 및 실험방법

(1) 실험재료
-시약 및 용액 : separating gel, stacking gel, staining solution, destaining solution, isobutyl alcohol,
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10% seperating gel 조성
solution A: 3.3 mL
solution C: 2.5 mL
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2) 실험방법
① 전기이동 기구들을 조립하여 separating gel 용액을 부을 수 있도록 장치한다.
② Separating gel 용액을 만들어 유리판 사이에 Pasteur pipet을 사용하여 spacer의 한쪽 면을 따라 살며시 흘러 넣는다. Stacking gel 용액을 부을 수 있도록 4-5 cm 정도 남겨 놓는다. gel에 공기 방울이 생기지 않도록 주의한다.
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4. Discussion
실험결과의 gel 의 푸른색 띠가 흐릿하게 나와서 색조정을 약간 해보았으나 완전히 뚜렷해지진 않았다. 우선 단백실시료의 띠를 보면 하나의 띠는 아주 확실하게 나온것을 확인 할 수 있다. 이 띠는 High size marker와 Low size marker 의 한 띠와
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BSA의 경우에는 단백질 띠의 smiling현상이나 측면에 끌림 현상이 나타나는 것을 알 수 있다. 이것은 특히 5,6조의 실험결과에서 많이 나타났다. 이러한 현상의 원인은 단백질 로딩양이 많거나 stacking gel부위가 짧은 경우, 전기영동시 온도가 과도하게 올라간 경우이다.

참고 자료

1. http://www.elpisbio.com/sub/support/protocols/SDS-PAGE-gel.htm
2. David L. Nelson, Michael M. Cox 공저, 2006, 생화학(상), 월드사이언스, pp92~94