Phenol chloroform Isoamyl alcohol 제작 및 사용

소개글

Phenol chloroform Isoamyl alcohol 을 제작하는 방법과 제영, 그리고 사용법을 수록하였습니다. 실험을 할 때에 보편적으로 사용하는 방법입니다.

목차

Phenol
equilibration of phenol
Phenol:Chloroform:Isoamyl alcohol(25:24:1)
Removal of protein
phenol:chloroform 추출

본문내용

Phenol : 상업적으로 생산되는 액화 페놀은 깨끗하고 색이 없다. 그리고 사용을 할 때 재증 류과정이 필요 없다. 때때로 액화 페놀이 분홍 또는 노랑을 띄는데 이러한 것은 사 용하지 말고 생산자에게 돌려보내야 한다. 고체 페놀은 산화물을 제거하기 위해 160℃에서 재증류를 해야 한다. quinone과 같은 산화물은 phosphodiester를 붕괴 시키거나 RNA와 DNA를 cross-linking시킨다.

equilibration of phenol
페놀을 사용하기 전에 pH >7.8 로 equilibrate한다. 왜냐하면 DNA partition이 산 성일 때 유기층에 녹기 때문이다. 장갑을 끼고, 마스크를 하고, 실험가운을 입고 운반 한다.

1. 액체 페놀은 -20℃에서 보관한다. 녹일 때에는 68℃에서 녹인다. 농도가 0.1%가 되 도록 hydroxyquinoline을 녹인다. 이 용액은 항산화성을 띄고, RNase의 저해작용을 하며 금속 이온에 대해 약한 chelator이다. 그리고 이 용액은 유기층임을 확인하기 편 하도록 8-hydroxyquinoline을 넣어 노란색을 띄도록 한다.

2. 페놀을 녹이기 위해 동량의 buffer를 넣는다. magnetic stirrer로 15분 교반한다. 두 층으로 분리가 되면 상층액을 유리 pipette을 이용하여 가능한 만큼 덜어낸다.

3. 동량의 buffer를 넣고 위의 과정을 반복한다. pH > 7.8이 될 때까지 반복

4. 최종적으로 수용액층을 제거하고 갈색병에 4℃에서 보관

참고 자료

없음