DNA recombination <ligation, transformation>

소개글

분자생물학

목차

I. Introduction
1. Gel electrophoresis
2. Gene cloning의 2단계 - 얻은 유전자를 vector에 삽입(Ligation)
- Vector의 기능
- Vector의 종류
Recombinant DNA
DNA 의 구성
- 실험순서

1. Transformation
① Transformation 의 개념
②Competent cell 이란?

본문내용

I. Introduction

1. Gel electrophoresis

PCR product의 전기영동은 agarose gel에서 시행한다. 전기영동의 원리는 sample을 gel에 loading 한 후 전기를 걸어서 sample의 각 성분이 크기에 따라 다르게 움직이는 성질의 차이로 분리하는 것이다.


- Electrophoresis buffer solution

Electrophoresis를 할 때 gel이 잠기는 buffer solution에는 여러가지가 있으나 주로 TAE와 TBE가 많이 쓰인다.TAE는 주로 agarose electrophorsis에, TBE 는 DNA sequencing에 사용한다. 조성은 다음과 같으며 대량을 쓰므로 미리 많이 만들어놓고 필요할 때마다 희석해서 부어서 사용한다.

Commonly used electrophoresis buffers

buffer Concentrated Stock Solution (per liter)
Tris-acetate (TAE) 50X
242g Tris base
57.1ml 0.5M EDTA (pH 8.0)
Generally used for agarose EP


Gel loading buffer

DNA를 확인하기 위해서는 sample에 담는 loading buffer가 필요하다. 이 buffer는 분자량이 큰 glycerol 등 무거운 물질이 함유되어 있어서 DNA가 든 시료를 gel 속에 잘 가라앉히고, 파란색을 내는 bromophenol blue가 들어 있어서 electrophoresis하는 동안에 현재 어느 정도 진행되어 있나 눈으로 보아 알 수 있게 해 준다.다음과 같은 몇몇 종류가 쓰인다.

Gel loading buffers (6x)

I
0.25% bromophenol blue
0.25% xylene cyanol FF
40%(w/v) sucrose in water
II
0.25% bromophenol blue
0.25% xylene cyanol FF
15% Ficoll(Type 400) in water
III
0.25% bromophenol blue
0.25% xylene cyanol FF
30% glycerol in water
IV

참고 자료

없음