PCR의 모든 것

소개글

중합효소 연쇄반응(polymerase chain reaction, PCR)은 1983년 Kary Mullis에 의해 고안 되었는데 이는 80년대 제한효소의 발견에 의한 Gene Cloning법에 이어 90년대를 화려 하게 장식한 생명공학 연구의 혁명적인 사건이다. PCR은 특정 DNA 부위를 특이적으로 반복 합성하여 시험관내에서 원하는 DNA 분자를 증폭시키는 방법으로서, 아주 적은 양의 DNA를 이용하여 많은 양의 DNA 합성이 가능하므로 분자 생물학적으로 제한효소의 발견만큼 획기적인 것이라고 할 수 있다. 중합효소 연쇄반응을 통하여 in vitro상에서 특정 부위의 DNA를 105～108배까지 수시간내에 증폭시킬 수 있으며, 이렇게 증폭된 DNA를 여러가지 실험에 이용할 수 있고, 실험 결과를 토대로 여러 의학적인 연구에 응용할 수가 있다. PCR은 이제 분자생물학 전반에 널리 관여하고 있어서 PCR이 적용되지 않는 실험은 생각하기 어려울 정도가 되었다. 이제는 매일 같이 PCR 관련 기법이 쏟아져 나오고 있어 PCR 응용분야가 더욱 더 확대되리라 생각다. 그렇다면 PCR의 원리와 응용분야를 구체적으로 살펴보자.

목차

1. 서론 : PCR 개요
2. 본론 : PCR, PCR의 응용, PCR의 응용분야
3. 결론
4. 참고문헌
5. 참고사이트

본문내용

3) PCR의 과정

① 얼음을 준비해서 미리 10Xbuffer 와 dNTP, primer, template를 녹인다.
② PCR tube 하나당 10Xbuffer는 1X로, template 20ng으로, dNTP(2.5mM/㎕)는 10mM로 Taq polymerase(5U/㎕)는 5U로, primer는 각각 2 pmole이 되도록 넣고 나머지를 물 로 채워 50㎕을 맞춘다.
(Taq polymerase는 마지막에 냉장고에서 꺼내 넣는다.)
10 X buffer : 5㎕
dNTP(2.5mM/㎕) : 4㎕
template(20ng/㎕) : 1㎕
primers(1pmole/㎕) : 2㎕(upper), 2㎕(lower)
Taq polymerase(5unit/㎕) : 1㎕
D.W(증류수) : 35㎕
Final Volume : 50㎕
③ tube에 mineral oil 2 방울 정도씩 떨어뜨린후 thermal cycler에서 PCR 시작.
→ mineral oil의 역할은 증발방지
④ PCR 조건
94℃ 10min predenature
94℃ 1min denature
58℃ 1min annealning 35 cycles
72℃ 1min elongation
72℃ 10min post elongation
4℃ soak
⑤ PCR이 끝난후 전기영동을 통해 정확한 size가 증폭되었는지 확인한다.

참고 자료

1. 이정근, 오석준, 김종민 역, 바이오인포매틱스, 한빛 미디어, 2001
2. Snyder and Champness, "Molecular genetics of Bacteria" 1997
3. DNA Microarray와 최신 PCR 기법 수윤사 (2000)