[생화학]PCR

소개글

PCR법(polymerase chain reaction)은 유전자 진단 방법중 하나로 특정 DNA 영역을 시험 내에서 효소에 의해 증폭하는 방법이다.

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본문내용

PCR법을 유전자 진단에 응용하여 미지의 변이를 분석할 수 있다. 변이 유전자의 분석에서는, 특정 영역에 변이 존재여부를 알고자 함이며 몇 가지 방법이 있다.
첫 번째로 RNase 또는 화학적 절단에 의한 변이 검출법이다. 표지된 정상 배열 RNA 소식자를 PCR 증폭한 DNA에 보합결합하면, 변이 부위에 miss match가 일어나고, 이곳이 RNase A에 의해 절단이 일어난다. 이것을 겔 전기영동하여 염기 치환의 존재와 대강의 위치를 아는 방법이다. RNase A는 피리미딘의 3` 측만을 절단하며 모든 염기 치환을 알아낼 수 있지는 않다. 따라서 miss match 염기 C나 T를 화학적으로 절단하는 방법이 개발되고 있는데, 센스 쇄 또는 안티센스 쇄를 사용하여 점돌연변이의 확인이 가능하다.
두 번째로는 단일쇄 DNA 고차 구조 변화 검출법(PCR-SSCP)이다. DNA 단편을 변성시켜 단일쇄를 요소를 포함하지 않는 폴리아크릴아마이드 겔에서 전기영동하면, 각 DNA쇄의 염기배열에 다른 고차 구조의 단일쇄를 분리할 수 있다. 하나라도 염기 치환이 있으면 이 구조가 변화하고, 정상적인 배열을 가지는 DNA쇄와 구별할 수 있기 때문에 단일쇄 DNA 고차 구조 다형성(SSCP:Single Strand Conformation Polymorphism)이라고 불린다. 이 방법은 이동도의 차이로 변이를 결정하기 때문에, 정상 배열이 혼재하는 이형접합체나, 암 조직 등에서 감도가 높게 변이를 검출할 수 있다.

참고 자료

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