[분자생물학] DNA 추출

목차

1. DNA추출의 의의
2. DNA추출방법의 다양성
3. 식물의 DNA추출
4. DNA추출의 화학적방법과 물리적 방법

본문내용

왜 유전공학에서 DNA추출이 필요한가? DNA는 세포의 핵에 있다. 유전 공학자들이 DNA를 연구하고 그것을 다른 유기체에 옮기기 위해선 처음에 세포에서 꺼내야 한다. 다행히도 DNA 구성 성분은 과학자들이 그것을 죽이지 않고 연구하고 공부할 수 있게 살아있는 세포 밖에서도 얼마간 변하지 않고 남아있다. DNA를 추출하기 위해선 조직 샘플을 식물에서 가져와 세포를 부수기 위해 으깨야 한다. 다음 DNA가 쉽게 용해될 수 있게 완충액으로 처리된 소금 용액을 더한다. 그 DNA는 지방이나 단백질과 같은 다른 구성 물질이 용해될 수 있는 유기 용액을 더해서 정화 시킨다. 정화된 DNA는 따로 분리되고, 알코올을 더해 용액에서 침전물로 바꾼다.

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일단, 물리적인 방법은 다른 방법들에 비해 쉽고 빠르게 처리할수있다는 장점이 있다...하지만, 이 방법을 쓰면 세포가 손상되는것을 막기는 힘들다.
DNA 구조가 단순하고, 대량으로 추출해야할경우에 아주 유용하게 쓰인다.
화학적인 방법은 물리적인 힘을 가하지 않아서 유전자는 매우 안정한 상태를 유지 할 수 있다. 하지만 시간이 오래 걸린다는 단점이 있다.
DNA구조가 복잡해서 정교한 작업을 요할때 요긴하게 쓰이는 방법이다.

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(1) 40ml의 L-broth 에 균을 접종하여 37℃에서 overnight시킨다.
(2) 15,000×g, 4。C에서 10분간 원심분리를 한다.
(3) 20×SSC buffer 4ml에 재현탁한다.
(4) SDS 40mg을 첨가하고 실온에서 흔들어준다.(lysis가 일어나 점성이 생길 때까지) - 동절기에는 30。C에서 흔들어 준다.
(5) PCI를 동량을 첨가한다음 강하지 않게 그러나 완전히 잘흔들어 mix하여 변성된 단백질이 중간층에 생성되도록 한다.
(6) 수층 (상층)을 취해서 3번 더 PCI extract를 반복한다.

참고 자료

스티브존스, 유전학, 김영사, 2006,