[식품미생물] Reaction kinetics of Alcohol dehydrogenase

목차

1. Purpose

2. Materials

3. Procedures

4. Result

5. Conclusion

6. Discussion
1) Calculate Vmax and KM of your enzymes
2) Discuss characteristics of your enzymes

본문내용

1.Cell cultivation 5ml를 37 ℃, 250rpm에서 전배양 시키고 OD 0.6에서 IPTG induction 후 30℃ 200rpm에서 본배양을 시킨다. 2. Cell harvest 3. Cell lysis using a sonicator 4. NADH assay Pipet과 e-tube 등 필요한 기구들을 준비하고 Spectrophotometer를 340nm로 setting한다. 그리고 buffer, enzyme, substrate, NADH 순으로 혼합하고 300초(5분) 동안의 흡광도를 측정한다.

<중 략>

A11부터 E11순서로 기질의 농도를 높은 것으로 실험을 했다.그래프를 보면 A11은 처음부터 거의 일정하게 나타났고 B11은 약간 증가하다가 약 35초 이후로 일정했다. 그리고 C11은 약 50초부터 거의 증가하지 않고 일정했으며 D11은 약 150초 이후로 일정했다. 기질의 농도가 가장 높은 E11은 약 200초까지는 약간씩 증가했다. 그리고 기질의 농도가 높을수록 OD값이 크게 나타났다. 즉, OD값은 기질의 농도가 높을수록 오랫동안 증가했고 그 수치도 높게 나타났다.

<중 략>

실험에서 사용한 NADH는 alcohol dehydrogenase이다. 반응을 통해 NADH는 NAD+로 변한다. 이런 반응에서는 NAD+/NADH 변화속도를 측정하여 반응 속도를 측정하기도 한다.그리고 NADH의 구성원소인 Nicotoneamide의 흡광도가 산화/환원상태에 따라 달라진다.NADH는 260nm와 340nm 파장을 흡수하지만, NAD+ 는 260nm 파장만 흡수한다. 이를 이용하여 흡광도를 측정하여 반응 속도를 알 수 있게 된다. NADH가 반응해서 NAD+로 바뀌면 340nm를 흡수하지 않게 되고 OD값은 증가하게 된다.실험결과 시간이 지날수록 기질의 농도가 높을수록 OD값이 증가한 것은 반응 속도가 증가한 것을 의미한다.

참고 자료

없음