Midi,Mini prep

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1. Mini Prep & Midi Prep 이란??
2. Mini / Midi Prep의 핵심 원리
3. Mini / Midi Prep에 쓰이는 시약
4. Cloning
5. Cloning의 핵심과정
6. Polymerase Chain Reaction (PCR)?
7. Vector의 기능
8. Plasmid Vector
9. Bacteria Plasmid의 종류
10. 제한효소(restriction enzyme)
11. Ligation
12. Transformation의 개념
13. Transformation 방법
14. Competent cell 이란??
15. 항생제를 이용한 selection

본문내용

•세포벽을 깬다.
: 이때 세포막은 유지되도록 함. 세포벽을 군데군데 무너뜨리는 물질은 EDTA이며,
이때 sucrose나 glucose가 첨가되어 세포의 형태를 유지하도록 해야 함. 때로는
lysozyme을 쓰기도 함.

•DNA 분리
: 세포막을 조심스럽게 깨서 크기가 큰 chromosomal DNA가 너무 잘게 조각나는것을 방지하면서 용액에 DNA 를 노출 시킴. SDS라는 detergent가 세포막을 녹여버리면서 안에 있던 세포 내용물이 용액으로 흘러 나오게 됨. 이때 바로 alkali 용액에 노출된 DNA는 모두 denature 됨. 그러나 크기가 작은 supercoiled plasmid DNA는 그다지 Damage를 받지 않는 성질을 이용.

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