kinetic analysis

목차

1. 목적

2. 원리

3. 기구 및 시약

4. 방법
1) Tyrosinase농도의 측정
2) kinetic assay를 위해 tyrosinase level 알아내기
3) L-Dopa의 Km
4) tyrosinase의 활성억제

5. 결과
1) Determination of the Tyrosinase Level
2) Km of L-Dopa
3) Determination of the Inhibitor Level
4) Inhibition of Tyrosinase Activity

6. 고찰

7. 참고문헌

본문내용

효소반응속도론(enzyme kinetics)이란 효소학(enzymology)의 한 분야로서 효소반응의 속도를 결정하는 효소의 농도, 기질의 농도, 속도상수 등 효소반응의 특성을 학습하는 생화학의 핵심 분야 중 하나이다. 실제 항암제, 항바이러스제 등 치료용 약물의 대다수는 효소의 저해제이다. 즉, enzyme kinetics는 기초 생화학 뿐 아니라 신약개 발에도 필수적인 분야이다. 이 실험은 tyrosinase라는 효소를 이용하여 효소반응속도론을 학습하는 것을 목적으로 한다

<중 략>

tyrosinase는 ice bath에 저장되어야 한다. spectrophotometer의 파장은 475nm로 맞춘다. 이떄, 적절한 효소의 농도를 찾는 것이 중요한데 너무 적거나 많아버리면 실험에 악영향을 끼치기 떄문이다. dopachrom assay를 위해 475nm에서 2분간 linear한 변화를 보이는 정도가 좋다. 실험 과정은 먼저, phosphate 버퍼와 L-dopa를 큐벳에 넣고 섞은후 spectrophotometer에 위치시킨다. 2분간의 recorder trace를 얻는다. 다음으로, 적당한 양의 효소를 큐벳에 넣은후 흔들지 않으면서 섞으후 바로 spectrophotomete에 위치시킨다. 결과를 확인후 평균 △A/min을 계산한다.역시 같은 방법으로 적당한양의 tyrosinase을 2분동안 30초마다 흡광도를 측정한다.위의 과정을 다른농도의 tyrosinase로 반복한다. A475 vs time으로 그래프도 그린다.

<중 략>

적당한 양의 효소level이 결정되었으므로 kinetic constant를 평가 할 수 있다.L-Dopa의 Km은 2번의 실험과정과 같은 방법에 의해 얻어질 수 있다. 효소의 농도를 선택한 후, 5개의 assay를 위해 table을 준비한다. 각 assay의 총 부피는 3.0ml으로 맞춘다. 오직 L-dopa와 버퍼의 양만이 서로 다를 것이다. 나머지 과정은 2번 과정과 같다.

참고 자료

http://blog.naver.com/lhh218600?Redirect=Log&logNo=70096800010