plasmid DNA추출 및 확인 후 enzyme 제한효소 처리

목차

1. 실습목적
2. 실험의 이론적 배경
3. 실습 재료 및 방법
4. 실습 결과 및 토의
5. 실습결론
6. 참고문헌

본문내용

LB액체배지에 Bacteria를 배양한 뒤 plasmid DNA를 추출하고 DNA를 제한효소로 잘라 전기영동하여 분석함으로써 제한효소의 특성과 반응을 이해한다.
2. 실험의 이론적 배경
- 배경
1)제한효소
DNA의 특정한 염기배열을 식별하고 이중사슬을 절단하는 엔도뉴클레아제(핵산분해효소의 하나)로서 유전공학에서 재조합 DNA를 만들기 위해서 사용하는 특수한 효소이다.

2)AGAROSE 젤 전기영동
겔 전기영동법(gel electrophoresis)의 하나로서 정제된 한천 겔(gel)을 지지체로 사용하여 직류 정전압의 전류를 통함으로써 하전된 목적물질을 분리한다. 핵산 특히 DNA 분자나 그의 단편(제한효소처리로 생성된 단편)의 분리에 사용되고 있다. 보통 0.5~2.0% 농도의 아가로오스를 사용한다. 이 겔(gel)을 유리관 중에 만든 디스크(disc)식과 수직 혹은 수평의 겔판(gel plate) 중을 전기이동시키는 평판식이 있다. DNA는 -(음)로 하전하므로 ＋(양)전극으로 영동하며 분자의 크기에 따라 작을수록 빨리 영동한다. 또 영동속도는 DNA 분자의 형상에 따라서도 다르며 같은 분자량이라도 폐환상, 직쇄상, 개환상의 순으로 이동한다. DNA의 위치는 에티듐브로미드 용액으로 염색시켜 자외선으로 조사하면 붉은 색 또는 오렌지색의 밴드로 검출된다. DNA의 제한효소처리와 조합시켜 DNA 단편의 분자량결정, 플라스미드의 검출, 특정 DNA 단편의 분리 등 핵산 연구법 중에서도 장치의 간편화 등으로 일상적인 방법으로 이용되고 있다.

3)제한효소의기능
제한 효소(restriction enzyme)는 DNA 내 특정 염기 서열을 인식하여 잘라내는 효소입니다.
원래 생물체내에서는 제한 효소를 이용하여 유전자의 돌연변이 부분을 제거하는데 사용되는 효소인데오늘날의 분자생물학적인 기법에서는플라스미드를 잘라 새로운 유전자를 끼워 넣는유전자 재조합 방법에 이용되는 효소입니다.

참고 자료

[생물학실험1] DNA의 구조 및 추출DNA 전기영동 결과보고서 결)생물학실험+9주차+Prep+결과+report
http://blog.naver.com/nanohelix Redirect=LoglogNo=70179917885
http://blog.naver.com/h2hiro28 Redirect=LoglogNo=140037000350