[생화학실험] 유전자 클로닝(Lac z gene) 의 실험방법 및 재료

목차

1. 균 배양용 배지 만들기
2. B-galactosidase 효소 활성 확인
3. Chromosomal DNA 추출
4. Chromosomal DNA 확인 agarose gel 전기영동
5. spectrophotometer 사용 함량 및 순도 측정
6. Chromosomal DNA와 vector의 절단,BamHI 절단
7. PCR 이용 chromosomal DNA lac Z gene 증폭
8. Chromosomal DNA와 Vector의 ligation
9. 대장균의 형질전환
10. 형질전환된 재조합 대장균의 선별
11. 재조합 플라스미드의 분리 및 Insert DNA 확인
12. 세포의 조추출액 제조
13. 친화크로마토그래피 이용 단백질 정제
14. 단백질 정량
15. SDS-PAGE
16. B-galactosidase활성 정량 : 활성,비활성

본문내용

1. 균 배양용 배지 만들기
1) 실험목적 - 대장균 배양용 LB 배지,유산균 배양용 MRS 배지,재조합 미생물 배양용 LB/Ampicillin 배지를 만든다.
2) 실험방법 - 준비된 시약을 삼각플라스크에 넣어준 후 autoclave로 121°C 상태에서 15분간 멸균 후 clean becnch에서 식혀준다.
암피실린 배지는 암피실린을 첨가한 후, 식혀진 용액을 plate에 20~25ml에 분주한다. 굳으면 wrap으로 포장하여 냉장고에 보관한다.

<중 략>

1) 실험목적 - Bradford method를 통해 standard curve를 이용하여 단백질을 정량한다.
2) 실험방법 - tube에 표준 단백질 용액(BSA)과 미지 단백질 용액 시료를 표와 같이 준비한다. 미지 단백질 시료 용액은 sodium phosphate buffer로 1/10 희석하여 사용한다. 각 tube에 bradford solution(5X)를 200ul 씩 넣어 final 1x가 되게 한 후 vortexing 한다. 5~30분 사이에 595nm에서 흡광도를 측정한다. 측정한 흡광도 값을 이용하여 excel로 standard curve를 그려보고 수식을 만들어 미지 시료의 단백질량을 계산한다.

참고 자료

없음