Enzymatic Assay of alpha-Galactosidase
- 최초 등록일
- 2014.06.16
- 최종 저작일
- 2013.05
- 5페이지/
한컴오피스
- 가격 1,000원
목차
1. Title
2. Purpose
3. Theory
4. Materials
5. Methods
6. Results
7. Discussion
8. Reference
본문내용
2. Purpose
Bradford 시약을 이용하여 protein을 정량하는 Bradford Protein Assay와 α-Galactosidase Assay를 통해 α-Galactosidase의 enzyme activity와 enzyme specific activity를 구하는 방법을 배워본다.
3. Theory
[Fig ] Fabry disease pathway
1) Fabry Disease
Fabry disease는 성염색체 열성 유전병(Xq21.33)으로 지금까지 알려진 40여 가지 이상의 유전성 리소좀 저장 질환 중의 하나이다.
인체 내에 필요한 대사산물 중 globotriaosylceramide는 3개의 당과 지질인 ceramide로 이루어져 있다. 이는 인체 내의 대부분의 세포에서 발견된다. 정상적으로 globotriaosylceramide는 lysosome에 있는 가수분해 효소인 α-Galactosidase A(α-GAL, α-gal A)에 의해 lactosylceramide로 분해되는데, Fabry disease 환자의 경우 이 효소가 결핍되었거나 완전한 기능을 발휘하지 못하므로 인체 내 다양한 부위에 globotriaosylceramide(GL-3)가 진행성으로 축적된다.
<중 략>
1) Tissue extraction(교실 준비)
1. mouse를 처리하여 각각의 장기를 떼어냈다.
2. 각 장기를 50㎎씩 무게를 달아 1.5㎖tube에 넣고 extraction buffer 200㎕를 넣어 10초간 sonication 했다.(20% Homogenization) (12조 : Fabry, Lung tissue)
3. 13,000rpm, 30min, 4℃에서 원심 분리했다.
4. 상층액을 1.5㎖tube(new)에 옮기고 4℃(ice)에 보관했다.(침전물이 들어가지 않도록 주의) → tissue extract
참고 자료
Textbook of biochemistry with clinical correlations, Devlin TM, 7th ed. p.238cc
[대사와 영양] Enzymatic Assay of alpha-Galactosidase 실습 강의록
http://healthinfo.amc.seoul.kr/healthinfo/medical/diseaseView 서울아산병원 건강정보 질환백과 - Fabry Disease
http://blog.naver.com/ Bradford Protein Assay
