크로마토그래피를 이용한 AP 분리

목차

I. Introduction
II. 도구
III. 실험방법
IV. 토의
V. 참조

본문내용

I. Introduction
1. chromatography는 ‘chrom=color’, ‘graphy=그림’ 의 뜻으로 옛날에는 색을 이용하여 혼합물을 분리하는 방법을 말했으며, 엽록소 분리가 이 예이다.
2. Chromatography에는 크게 3 종류가 있다.
- 전하에 따라 혼합물을 분리하는 ion-chromatography
- 분자량의 차이에 따라 혼합물을 분리하는 크기배제 크로마토그래피
- 순상과 역상 컬럼을 이용하여 극성 물질과 비극성 물질을 분리하는 분배 크로마토그래피
3. 이온 크로마토그래피는 고속액체크로마토그래피(HPLC)의 한 분야로서, 이동상으로 액체를, 그리고 고정상으로 이온교환수지를 사용하여 이동상에 녹는 혼합물과 그렇지 않은 혼합물을 분리하는 방법이다. AP는 solid 상태에서 음전하를 띠므로 양전하를 띠는 resin을 사용하여 분리를 해야한다. 이 실험에서는 DEAE를 사용하였다. (만약 양전하를 띠는 단백질을 분리하려면 음전하를 띠는 물질을 사용하여 분리해야 한다.)
4. 이온 크로마토그래피에는 용리액이라는 이동상이 존재하고, 이온 컬럼안에 고정상이 존재한다. 시료용액은 용리액에 의해 이온 컬럼으로 이동되어지고, 이온의 전하에 따라 나타나는 친화도의 차이에 따라 이동상에 녹아 있는 단백질들 중 고정상과 결합을 잘 하는것과 그렇지 않고 이동상과 함께 그냥 elute되는 단백질들의 이동속도가 달라져 각 이온별 분리가 일어나는 방법이다. 이를 분배 이론이라고 하며, 이온 크로마토그래피는 이 이론에 기반한다.

5. bead에 붙어 있는 functional group에 따라 resin의 종류가 다양한데, 이 실험의 경우에는 DEAE를 사용한다. DEAE는 (+) 전하를 띄고 있어서 주로 음전하를 띈 단백질들과 결합한다. 그 이유는 DEAE 구조안에 있는 N+때문이다. DEAE는 이러한 전기적 성질을 이용하여 양전하와 음전하를 띈 단백질을 DEAE에 통과시켜 음전하를 띈 단백질들을 붙잡게 한다. 이를 음이온 교환수지(anion exchange chromatography)라 하고, DEAE를 anion exchanger라 한다. anion을 걸러낸다는 뜻이다.

참고 자료

http://diegur.blog.me/90130784385
http://blog.naver.com/lbd007?Redirect=Log&logNo=140016446643
http://irf.snu.ac.kr/02_facility/FacilityView.htm?fi_item=39_ic