플라스미드DNA의 분리

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목차

1. Date
2. Subject
3. Introduction
플라스미드 DNA의 분리
제한효소 (Restriction Enzyme)
제한효소에 의한 DNA의 절단
4. Method
5. Result & Discussion

본문내용

3. Introduction
플라스미드 DNA의 분리
형질 전환 균주가 갖고 있는 플라스미드에 존재하는 내성 유전자에 상응하는 항생물질이 들어간 선택배지에서 이 균주를 배양하면, 플라스미드를 갖고 있는 형질 전환 균주는 항생물질이 존재하는 배지에서 살아남는다. 이 균주를 액체 배지 상에서 적당한 세포수로 배양한 후 회수해서 플라스미드를 얻을 수 있다. 세포를 끓이거나(중탕 방법) 세포를 알칼리 상태에 두면(알칼리 세포파괴 방법) 세포가 용해되면서 세포내에 존재하는 플라스미드가 세포 밖 수용액 상에 나오게 된다. (DH5 나 Sure와 같은 전이가 일어나 대장균은 endonucleaseⅠ을 발현하는 endA 유전자에 전이가 일어나 endonucleaseⅠ이불활성이므로 중탕 방법을 사용할 수 있으나 wild-type endonucleaseⅠ을 갖고 있는 균주에서는 endonucleaseⅠ이 열에 강하므로 중탕 방법을 사용할 수 없다.) 각각 처리한 후 원심분리를 통해 세포 잔여물을 제거하면 플라스미드가 다량으로 녹아 있는 수용액을 얻을 수 있다. 이 수용액에 에틸 알코올이나 이소프로필 알코올을 처리하면 DNA가 침전되며 침전된 DNA를 적당한 완충용액에 녹임으로써 플라스미드 DNA를 정제할 수 있다.
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