형질전환 결과보고서

목차

1. 실험원리 (Introduction)
2. 실험목적 (Purpose)
3. 실험방법 (Method)
4. 실험결과 (Result)
5. 고찰 (Discussion)

본문내용

1. 실험원리 (Introduction)
1) 형질전환
형질전환이란 외부 DNA를 숙주세포 내에 넣어주어 세포가 원래의 성질과는 다른 새로운 유전형질을 추가로 얻게 되는 것을 말한다. E.coli의 형질전환은 초기에는 발견이 되지 않았으나 박테리아를 차가운 CaCl _{2}로 처리한 다음 잠시 열처리를 하면 박테리오파지가 세포로 들어가 파지를 형성한다는 사실에 의해 처음 관찰되었다. 이와 같은 처리는 박테리아가 DNA를 흡수 할 수 있는 수용능상태(competence)로 일시적으로 유도하는 것으로 박테리오파지뿐만 아니라 plasmid DNA 등 여러 종류의 DNA에 의해 형질전환이 될 수 있다.
2) Competent cell
Competent cell이란 정상적인 박테리아에 화학적 또는 물리적인 처리를 하여 DNA가 잘 들어갈 수 있게 만든 cell이다. ligation을 마친 DNA나, 원형 plasmid를 증폭하기 위해, 혹은 cloning을 끝내고 완성된 벡터가 있는데 그것을 expression하기 위해 E.coli에 형질전환을 해야 하는데, 이때 사용하는 E.coli 숙주세포를 Competent cell이라고 부른다.
※ Competent cell의 제조 원리
E.coli 형질전환을 위해서는 E.coli가 DNA를 흡수할 수 있는 상태가 되어야 한다. 이것이 가능하기 위해서는 DNA가 세포막 주위에 존재해야하는데 DNA는 phosphate에 의해 (-)전하를 띠며 세포막 또한 diacylglycerol이 (-)전하를 띠기 때문에 서로 척력이 발생하게 된다. 따라서 이를 중화시키기 위해 divalent cation(Ca ^{2+} ,`Rb ^{ 2+})등을 사용하는 것이다. 이를 사용함으로써 세포막 고유 전하가 변하게 되어 막구조가 불안정해져 흐물흐물한 형태가 된다.

참고 자료

없음