SDS-Polyacrylamide Gel Electrophoresis of Proteins(단백질 전기영동 결과)

목차

1. 실험목적
2. 시약 및 기구
3. 실험방법
4. 결과
5. 토의
6. 감상

본문내용

2. 시약 및 기구
1)시약
- Acrylamide와 N,N`-methylenebisacrylamide
N,N`-methylenebisacrylamidedms 여기서 Actylamide를 교차 결합시키기 위한 역할을 한다.(다공성 체 형태를 갖춤)
- Sodium dodecyl sulfate(SDS)
음이온 세제이다. 이것은 단백질에 결합하여 음극을 띄게 하는 역할을 하여 전기 이동을 하게 만든다.
- Running gel 과 stacking gel을 만들기 위한 Tris-buffers
이 완충용액은 Tris base와 함께 준비되어야 한다는 게 매우 중요하다. Tris base를 이온화하지 않은 물에 녹인 다음, 용액의 pH는 HCl로 조정한다.
- TEMED(N,N,N`,N`-tetramethylemediamine)
TEMED는 acrylamide와 N,N`-enebisacrylamide의 축합반응(교차 결합을 위한)에서 ammonium persulfate로부터 free radical의 형성을 촉매 함으로서 반응을 촉진한다.

< 중 략 >

5. 토의
이번 실험은 단백질의 전기영동을 통해 분석하고자 하는 단백질의 크기를 분리하는 실험이었다. 먼저 실험 방법부터 살펴보면 먼저 냉장고에서 gel을 꺼내 와서 비닐을 뜯고 전기영동 장치에 장착을 시켰다. 그 다음 0.5X SDS MOPS Running buffer를 부어주었다. 이미 casting 되어있는 gel을 사용하였기 때문에 우리가 번거로운 일은 없었다. 그 gel의 위쪽 부분은 acrylamide의 농도가 낮은 stracking gel 부분이다. Stacking이란 말은 말 그대로 로딩할 때 높이 차 때문에 출발점이 다른 단백질 샘플을 최대한 가깝게 다져주는 역할을 해주는 곳이다. 아래 부분은 running gel로 acrylamide의 농도가 높아서 잘 분리 되도록 해주는 부분이다.
그리고 나서 전기영동에 사용할 Marker와 Sample을 각각의 well에 넣어주었다. sample을 제일 첫 번째 well에 넣어주고(2 ㎕), 나머지 well에는 단백질 sample을 넣어주었다(10 ㎕). 우리가 거의 마지막 실험이라 그런지 sample들이 남은 것이 거의 없었다.

참고 자료

없음