단백질 정량법

소개글

4가지 단백질 정량법에 대한 간단한 내용과 장단점이 정리되어 있습니다. 정리된 자료를 원하시는 분에게 좋습니다

목차

1. BCA(Bicinchoninc Acid method)법
2.Kjeldahl법
3. Lowry법(Folin-ciocalteau)
4. 전기영동법
5. Bradford법
6. Coomassie blue법
7. 191쪽 요약

본문내용

1. BCA(Bicinchoninc Acid method)법
BCA법은 Lowry method을 계량한 것으로 Folin reagent 반응 대신 BCA가 구리이온과 복합체를 형성해 자색으로 발색되는 반응을 이용해 단백질의 농도와 보랏빛의 착화합물 형성 정도가 비례함을 562nm파장에서 그 흡광도를 측정함으로 단백질의 양을 측정하는 방법. 이 반응은 2단계에 걸쳐서 일어난다.
① 장점 : 비교적 최종 sample의 안정성이 높아 넓은 온도 범위에서 단백질 정량이 가능하다. 방법이 간단하다.
② 단점 : 반응이 느리고, 약간의 단백질의 변성이 있을 수 있다.
2.Kjeldahl법
단백질, 질소를 포함하는 타 유기물의 총 질소량 정량에 널리 이용된다. Protein을 촉매()가 포함되면 진한 황산과 함께 오래 끓이면 질소는 로 전환된다. 이 혼합물에 일정한 과량의 NaOH를 넣고 증류하면 Ammonia가 발생한다. 이 Ammonia를 용액에 흡수시킨 후 표준 산 용액으로 정적하여 Ammonia의 양, 즉, 질소의 양을 측정할 수 있다. Protein은 평균 16%가량의 질소를 포함한다. 1mg의 질소는 6.25mg의 단백질이라고 볼 수 있다. 따라서 Kjeldahl법으로 측정한 질소의 값에 6.25를 곱해주면 protein 함량을 알 수 있다. Kjeldahl에 의하여 개발되엇다. 매크로켈달법, 세미마이크로켈달법, 마이크로켈달법이 있고, 시료 중 질소량의 다소에 따라 방법을 선택한다.
① 장점 : 혼탁시료에도 적용된다. 단백질의 질소뿐만이 아니라 핵산, purine, pyrimidine 염기의 유도체, amide 화합물, 요소(urea), creatin 등도 이 방법에 포함된다.
② 단점 : 시료에 따른 오차가 생길 수 있다. 아질산 염, 시안화물, 히드라진의 유도체, 니트로 및 아조 화합물 등에 대하여는 수정이 필요하다.
3. Lowry법(Folin-ciocalteau)
Lowry 방법은 단백질 사슬의 아미노산에서 구리이온()의 아마이드 결합으로 환원()되는 정도를 측정하는 방법이다. Lowry 방법에서 사용하는 Floin-ciocalteau시약에 의한 발색은 뷰렛 시험에서와 마찬가지로 단백질과 알칼리성 구리와의 반응과 포스포몰리브덴산-포스포텅스텐산 염들이 단백질에 있는 티로신과 트립토판들에 의해서 환원되는 과정에서 단백질의 양에 비례하여 그 착색정도가 커진다.

참고 자료

없음