소개글
생명과학 실험의 기본이라 할 수 있는 PCR (Polymerase Chain Reaction)의 기본 원리를 이해하고, 적은 양의 DNA를 많은 양으로 증폭하고, 전기영동을 통하여 이를 확인하는 실험보고서
목차
Abstract
Introduction
Materials and Methods
Data and Result
Discussion
본문내용
Abstract
이번 실험은 생명과학 실험의 기본이라 할 수 있는 PCR (Polymerase Chain Reaction)의 기본 원리를 이해하고, 적은 양의 DNA를 많은 양으로 증폭하고, 전기영동을 통하여 이를 확인하는 것이었다. Template는 [실험 5]에서 얻은 cDNA를 사용하였고, 합성재료인 dNTP와 합성을 개시하는 한 쌍의 primer, polymerase의 활성에 적합한 10X buffer와 부피를 맞추기 위하여 DIW를 넣어주었으며 높은 온도에서도 안정한 Taq polymerase를 사용하였다. Cycle은 Denaturation (95 ℃, 30초), Annealing (55 ℃, 30초), Elongation (72 ℃, 1분)을 한 cycle로 30 cycle을 돌렸다. PCR product를 전기영동 해본 결과, 예상 크기인 1.4 kb 와는 다른 650 bp 크기의 band가 나왔다.
Introduction
PCR (Polymerase Chain Reaction, 중합효소 연쇄반응)은 특정 DNA 부위를 특이적으로 반복 합성하여 원하는 fragment를 증폭 시키는 방법이다. DNA 양이 아주 적더라도 원하는 부분을 엄청난 양과 높은 정확도로 크게 늘릴 수 있고, 장비 또한 단순하기 때문에 간단하고 짧은 시간 내에 증폭할 수 있다.
PCR은 1983년 Kary Mullis가 처음 고안하였으며 1987년에 그의 논문이 여러 유명 저널에 게재 되었다. 그 후 PCR은 그가 속해있던 Cetus 사에 의해 개량되고 발전 되었으나 특허 분쟁에 휘말리면서 현재는 Roche사가 그 특허권을 소유하고 있다. Kary Mullins는 PCR을 창안한 공로로 1993년에 노벨 화학상을 수상하였고, 최근에는 RT-PCR, Quantitative PCR, Real time PCR 및 Multiplex PCR을 비롯한 여러 응용기술이 개발 되고 있다.
PCR의 원리는 DNA의 구조에서 기인하는데 그 구조와 구성을 자세히 살펴보면 <Figure 1>과 같이 phosphate group, sugar, base로 구성 되어 있고, base의 종류는 A(adenine), G(guanine)의 purine group과 T(tymine), C(cytosine)의 pyrimidine group이 있는데 RNA는 T 대신에 U(uracil)을 가지고 있다. 이러한 구조에서 DNA는 phosphate group 이 있는 쪽을 5’ 방향, sugar 가 있는 쪽을 3’ 방향으로 하여 double strand 가 anti-parallel하게 이중나선을 이루게 된다. DNA polymerase는 3’의 OH 부분에 dNTP를 붙여주어 5’ 에서 3’ 방향으로 DNA 합성하게 되는데 PCR은 이러한 DNA polymerase 성질을 이용한 것이다
참고 자료
1. Sambrook J. and D. W. Russell, Molecular Cloning: A laboratory manual, 3rd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York, U.S.A, pp8.1~8.24
2. Watson 외 5인, Molecular biology of the gene, 2008, 6th ed., CSHL Press, pp127~130
3. 연세대학교 의과대학 생화학-분자생물학교실 http://biochemistry.yonsei.ac.kr/
4. http://bitesizebio.com/
PCR
10페이지
PCR 실험 레포트
8페이지
MS 워드 
