E.coli Transformation

소개글

DNA가 유전적 형질 전환을 한다는 것을 알아보기 위해서 Competent된 E-coli를 만든 후 transformation을 시킨다.

목차

주 제
실험 목적
재료 및 기구
실험 방법
실험 결과
고 찰

본문내용

주 제
E.coli Transformation
실험 목적

DNA가 유전적 형질 전환을 한다는 것을 알아보기 위해서 Competent된 E-coli를 만든 후 transformation을 시킨다.
재료 및 기구


plasmid vector, competent cell(E. coli) 담겨진 E-tube 2개, ice(4℃), LB broth, water bath, 온도계, agar plate(LB, LB amp), spreader, 알콜램프, incubator, rack, pipet, tip, polyglove, 70% 알콜
실험 방법





























1. 미리 만들어서 E-tube에 담아 냉동시켜놓은 competent cell을 ice에 30분 이상 꽂아놓고 완전히 녹도록 한다.
2. competent cell이 들어있는 E-tube 중 1개에는 plasmid vector(2㎕)를 넣고, 1개에는 plasmid vector(4㎕)를 넣고 가볍게 tapping하여 plasmid vector와 competent cell이 잘 섞이도록 하고, 다른 1개는 plasmid vector를 넣지 않는다.
3. ice에 30분 동안 둔다.
⇒ 얼음에 두는 시간은 competent cell의 종류와 실험목적에 따라 다르게 할 수 있다.
4. E-tube을 스티로폼에 끼워 42℃ water bath에서 90sec동안 heat-shock을 준 후 즉시 ice에 90sec동안 꽂아두어 충분히 식힌다.
⇒ E-tube을 움직이지 않게 한다.



5. LB broth를 800㎕씩 넣고 incubator(37℃)에서 45min동안 incubation시킨다. ⇒ 이 과정은 competent cell 내로 들어간 plasmid 내의 Amp 저항 유전자가 발현되도록 한다.
6. plate에 labeling한다.

참고 자료

없음